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        方案12.4 原代外植

        相关实验:原代外植

        最新修订时间:

        原理

        将组织切碎并浸洗,组织块接种于培养瓶或皮氏培养皿的表面,加入少量含高浓度血清(40 %~50 % ) 的培养基,表面张力使标本保持原位,直到它们自发地贴附于表面,随后细胞开始生长。

        材料与仪器

        步骤

        1. 将组织移入新鲜、无菌 BSS 漂洗。

        2. 移人第二个培养皿(25 cm2 培养瓶或 5~6 cm皮氏培养皿(组织培养级別),体积大小及生长培养基的使用量取决于所取组织的量 ,大约 100 mg 组织用 5 个25 cm2 的培养瓶)切除多余组织,如脂肪或坏死组织,再移入第三个培养皿。

        3. 用手术刀交叉切成约 1 mm3 的小块。

        方案12.4 原代外植

        4. 用移液管(10~20 ml 宽口吸头)将组织块移人 15 或 50 ml 无菌离心管或普通容器内(先用 BSS 或培养基湿润吸管,否则组织块易粘在吸管的内壁)。

        5. 让组织块静置沉淀。

        6. 用 DBSS(10 ml) 重悬冲洗组织块后静置,去除上清液,重复此步骤两次或更多。

        7. 将组织块转移至培养瓶中(记住先湿润移液管),每个 25 cm2 培养瓶大约接种 20~30 块组织。

        8. 吸去多余液体,每 25 cm2 生长面加入 1 ml 的培养基(生长培养基(如:DMEM 与 F12 等体积混合,再加 20 % 胎牛血清)),缓缓倾斜培养瓶将组织块均匀分布于生长面上。

        9. 盖上瓶盖,放于培养箱或温室内,37°C 培养 18~24 h。

        10. 若组织块已贴附,则可在未来 3~5 天内将培养基加至每 25 cm2 5 ml,以后每周更换一次,直到细胞已稳定生长。

        方案12.4 原代外植

        11. 一旦向外生长已形成,可用镊子将外植物取出,用预先浸湿的移液管再转移至新的培养器皿中(而后回到步骤 7 再接种)。

        方案12.4 原代外植

        12. 更换第一瓶的培养基直至细胞生长超过生长面积的一半,这时细胞可以传代了。

        来源:丁香实验

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