• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        传代的细胞如何抽提RNA

        相关实验:细胞 RNA 含量样品的制备及分析

        user-title

        cq2019

        我用PMA将THP-1细胞分化为贴壁的巨噬细胞后,培养了72小时,目前准备抽提RNA进行逆转录,请问应该如何抽提及对细胞浓度有啥要求?

        wx-share
        分享

        5 个回答

        user-title

        申东熙老伯

        有帮助

        根据用的试剂盒说明书来抽提RNA,细胞长得密的话6孔板一个孔就够了。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        按照你用的提取rna的kit里面的说明书,来确定细胞数量,如果用trizol提的话,一般用6孔板的一个孔就可以

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        抽提可以尽量浓度大一些,有利于后续实验进行

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        对于巨噬细胞的RNA提取,以下是一般的实验步骤:

        收集巨噬细胞:将培养好的巨噬细胞用PBS洗涤一次,去除PBS后,用三氧化二砷(Trizol)或其它适合的RNA提取试剂进行细胞裂解。注意在细胞收集过程中尽可能快地进行,以免RNA降解。

        裂解:将细胞与适当的裂解缓冲液混合,将混合物在室温下混合反应5-10分钟,然后将混合物转移到离心管中离心去除残留细胞。

        分离:将上清液转移到新离心管中,与同等体积的异丙醇混合,摇晃或轻轻翻转离心管混合后离心沉淀。

        洗涤:将沉淀用75%乙醇洗涤一次,去除沉淀后,使用RNase-free水溶解RNA。

        关于细胞浓度,RNA的质量和纯度与样品中的RNA量有关。通常需要对足够的细胞进行RNA提取,以获取足够的RNA量。细胞浓度应在1 x 10^6到5 x 10^6/mL之间,以确保足够的RNA产量,并尽量避免RNA分解。在逆转录过程中,可以使用同等量的RNA来合成cDNA,或者根据实验需要进行适当调整。

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        吸取培养液后用冰的pbs洗两遍,直接加入裂解液

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序