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科研学霸天团，48小时有问必答

问间接免疫荧光

土井挞克树

考虑非特异性染色的原因，建议更换抗体

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问大鼠盆神经

loveliufudan

在解剖上，大鼠盆腔神经位于大腿内侧和尾部附近的盆腔区域。具体来说，可以在大腿内侧股沟的上方或者在尾部底部找到盆腔神经。

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问F11神经元细胞培养

土井挞克树

考虑黑胶虫污染，建议消毒灭菌。

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问弗氏佐剂正式免疫能打入大鼠静脉么

天一湖医者

不能打入静脉，只能皮下注射或肌肉注射。

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问VX2冻存的组织移植问题

loveliufudan

对于VX2移植瘤种植到兔的后腿上后，其生长速度可能会因为多种因素而有所不同，例如移植物大小、兔子的生理状态、实验条件等。一般情况下，VX2移植瘤的生长速度可以在种植后的1-2周内明显加速，但具体的生长速度取决于多种因素。一周后，VX2移植瘤通常会形成明显的肿块，但具体大小会因为以上提到的因素而有所不同。如果需要对瘤体大小进行精确测量，可以使用肿瘤体积的方法，即测量瘤体的三个直径（长、宽、高），然后

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问大鼠尾静脉取血检测胰岛素

loveliufudan

进行大鼠尾静脉取血检测胰岛素时，一般需要抽取一定量的血液才能进行检测。通常，抽取的血液量应该是大鼠体重的1%-3%，也就是说，对于体重为200-300g的大鼠，每次取血量应该在2-6mL之间。需要注意的是，在进行尾静脉取血时，应该采取正确的操作步骤和方法，以避免对大鼠造成不必要的伤害。同时，也应该注意血样采集的时间，以避免影响胰岛素的测定结果。在进行胰岛素的ELISA检测时，需要使用专门的胰岛素试

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问Dkk1

sswei

DKK1是Wnt/β－catenin信号通路的可溶性抑制剂，它在骨骼发育和骨代谢的过程中都发挥着至关重要的作用。

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问淋巴细胞分离计数实验计数偏低的原因！！

天一湖医者

可能原因，温度是否没有调好，温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果。在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面。Ficoll应适量，外周血应充分稀释。

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问求助关于Jurkat细胞的问题。

sswei

Jurkat细胞如果用慢病毒做成car-t，不具有永生能力。如果用慢病毒转染，转染前可使用CD3/CD28抗体进行激活。慢病毒转染后，可以对肿瘤细胞进行杀伤，CD4比CD8的杀伤作用差些。

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问肿瘤干细胞传代

loveliufudan

传代和扩培肿瘤球（tumor spheres）的方法可以因实验目的、肿瘤类型和细胞培养条件等而异，但以下是一般的操作步骤：用PBS或无酶胰消化液将肿瘤球收集起来，放到50 ml离心管中，然后离心洗涤2-3次，去除细胞碎片和培养基残留物。将肿瘤球重悬于新的培养基（如肿瘤球培养基、serum-free medium等），一般是将每个肿瘤球接种到新的96孔或24孔培养板中。等待肿瘤球重新附着和生长。通常

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问SMD1168和GS115感受态从-80拿出来在冰上化了半个小时，怎么看是否

loveliufudan

在半个小时的冰上解冻之后，如果上层已经稍微澄清，这可能意味着感受态已经成功地被解开。但是，如果下层仍然是白色浑浊的，这可能意味着它们还没有完全解开。在这种情况下，您可以轻轻地摇晃样品管，以帮助混合液体并促进解开。如果您想进一步确认细胞悬液是否已经成功地解开成为可测量的液态状态，您可以尝试进行进一步的实验，例如使用比色法或荧光检测法检测其蛋白质含量或活性等指标。

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问求胶原蛋白免疫荧光染色方法

土井挞克树

胶原蛋白免疫荧光染色方法：1.天青石蓝液的配制：天青石蓝（Celestin blue B） 1.25g　硫酸铁铵（ferric ammonium sulfate）1.25g蒸馏水 200ml甘油（glycerin） 30ml将前两者溶于蒸馏水中，然后煮沸，冷却后过滤，再加入甘油和麝香草酚。Mayer氏苏木素的配制苏木素 0.1g　蒸馏水 100ml钾明矾（Potassium alum） 5g柠檬酸

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问请问Slc7a5 fl/fl 与Col2a-Cre;Slc7a5fl/fl有什么区别，谢谢🙏

土井挞克树

SLC7A5fl是一种能将胺基酸运送入细胞内的细胞表面蛋白，而col2a-cre是介导表达的基因。

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问请问细胞迁移不均匀是怎么回事呢？

土井挞克树

细胞数量有点多，迁移不均匀首先考虑迁移胶不均质的问题

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问hepg2细胞做迁移实验transwell穿不过去

loveliufudan

在您的实验中，由于细胞大小超过了孔径大小，这可能是导致细胞无法穿过半透膜的原因之一。为了确定是否是孔径大小的问题，您可以尝试使用具有更大孔径的Transwell小室进行实验。您还可以尝试使用其他细胞类型，看看它们是否可以穿过半透膜，以确认实验方法是否正确。另外，您需要确保在实验过程中使用适当的实验条件，例如适当的培养基、细胞密度和处理时间。如果有必要，您可以尝试优化实验条件，以提高细胞迁移的效率。

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问DIO染料标记细胞膜

土井挞克树

把荧光材料用抗体孵育然后和细胞膜结合

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问有核红细胞裂解液

土井挞克树

一般有核红细胞需要等成熟后再进行裂解。选择常规的红细胞裂解液就可以

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问Annexin V-FITC/PI染色出现假阳性？

sswei

在凋亡实验中，经常会出现假阳性或与预期结果不符的情况，可能的原因有补偿调节不当、细胞浓度过高、消化过度、药物干扰、药物处理时间过长、样本自身问题等多个方面，过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤，造成假阳性。

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问confocal封片不平导致细胞不在同一个平面上，无法聚焦是什么原因导致的？

土井挞克树

可能的原因有1.标本凹凸不平2.标本消化不足3.封片不平

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问细胞分选

土井挞克树

可以用流式实验做GABA分选，注意做好分选标签。

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