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科研学霸天团，48小时有问必答

问显微镜下细胞污染的东西能看清楚结构吗？细胞培养基开封后能保存多久？。

汤姆卜丽波

高倍镜下其实还是可以看到的，培养基开封了之后分装保存能用两三个月

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问细胞培养中胎牛血清的作用是什么？其他动物的血清为什么不行？

汤姆卜丽波

胎牛血清的主要作用是提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物，提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力.解毒作用，以及是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源.选择胎牛是因为没有接触外界，血清内对细胞有损害的补体那些比较少，也有其他血清的

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问Raw264.7细胞培养过程中很容易分化，该如何解决？

认真搞科研的小王

1.控制细胞密度2.添加抑制分化的试剂3.优化培养条件，如温度、二氧化碳、培养基等4.定期要定期观察细胞形态和生长状态，并记录下来，分析细胞生长规律

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问霉菌污染和真菌污染长啥样啊，怎么区分呐？细菌污染很容易发现，支原体污染也好区分。

认真搞科研的小王

通过显微镜观察受污染的细胞培养物表面，然后根据形态特征来判断其为霉菌还是真菌污染。霉菌菌丝体呈分枝状，而真菌体则呈菌落形态，这些特征可以通过显微镜观察到。培养特征：将受到污染的培养物分别接种到富含糖和氮元素的基础培养基上，让其自然生长，在不同时间段内观察其生长情况。当在培养基上看到颜色深、松软且不透明的毛状结构出现时，则为霉菌污染；当在培养基上看到较为规则的单个或者类似球形的白色或透明菌落时，则为

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问细菌污染怎么救呀？不知道怎么就细菌污染了，不是很严重。

认真搞科研的小王

对于已经被细菌污染的细胞培养物，应该及时更换新的培养基，并进行均匀洒落抗生素等药物来杀死残留细菌。同时，观察细胞培养情况，确保培养物恢复正常。为了防止仍然存在污染，您还应该在进行进一步试验前对已经进行救援的细胞培养物进行验证或重新测定。

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问求助加细菌处理的细胞划痕实验操作流程

认真搞科研的小王

1.先培养细胞到合适的细胞密度（80%左右）2.培养细菌到有足够的菌数。3.将细菌菌株制备成适当浓度(106-108 CFU/mL)的菌液，在细胞培养皿上滴加一定的菌液（含菌量可根据个人需求调整）。4.细胞划痕：使用75％的酒精或70％的乙醇用棉球消毒细胞培养皿周围区域，然后使用细胞刮板在细胞层上沿着直线划出一个缺口（痕迹大小可根据个人需求调整）5.检查细胞和菌液：将培养皿放回CO2孵化器中，观察

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问染色过后，要将培养皿放入37℃培养箱，但为什么不能放到37℃ CO₂培养箱，可能有什么影响？

认真搞科研的小王

因为二氧化碳培养箱中的高浓度二氧化碳可能会对已染色的样品产生不利影响。高浓度二氧化碳可以导致pH下降，这可能会影响某些细胞的生长和代谢，进而导致细胞死亡。此外，高浓度的二氧化碳也可能会与染料相互作用，导致染色结果的改变。因此，将染色后的培养皿放入普通的37℃培养箱中是更为合适的选择，因为普通的培养箱通常提供较低的二氧化碳浓度和稳定的pH值，这有助于保持样品的稳定状态，最大限度地提高生长效率。只有具

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问gibco家的双抗，为什么会变黄？

loveliufudan

双抗试剂在储存和使用过程中可能会出现颜色变化的情况，其中变黄是常见的现象之一。这种颜色变化可能是由以下因素引起的：1. 氧化反应：双抗试剂中的某些成分可能会受到氧化反应的影响，导致颜色的变化。氧化反应通常发生在试剂与空气中的氧气接触时，尤其是在试剂瓶口或盖子上形成的氧化层。2. 光敏感性：某些双抗试剂成分对光敏感，暴露在光线下可能会导致颜色变化。这可能发生在试剂在运输或储存过程中受到光线暴露的情况

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问菌污染牛奶相关问题

认真搞科研的小王

牛奶中菌的灵敏度检测和回收率实验是两个不同的测试，用于评估不同方面的细菌分析质量。灵敏度检测可以确定试验方法对目标菌株的检测能力，并且通常是在对比不同菌株检测方法的灵敏度时进行的。如果您想确认您的检测方法对该菌株的敏感性，请进行灵敏度检测。而回收率实验通常是在检查您的样本制备和处理技术是否良好时使用的。这种方法可用于确定您的样品处理是否会影响细菌的数量和生长状态。如果您想确认您的样品制备和处理技术

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问LDH释放试验死亡细胞的类型

土井挞克树

LDH释放实验只能证明死亡，如果想看死亡途径还需要继续添加辅助实验证明死亡途径

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问晶状体上皮细胞培养

认真搞科研的小王

培养时间过长，，可以在培养2天时换液培养基pH不适宜：pH值过高或过低都会对细胞的生长和存活产生影响。您可以调整培养基的pH值，优化培养条件。细胞密度过高：过高的细胞密度会使得细胞互相竞争营养物质，导致部分细胞死亡。在进行传代前，应当注意控制细胞密度。感染：细胞培养中的感染是比较常见的问题，如果使用污染的试剂、器皿或者细胞上空气中的微生物污染等，都有可能导致细胞死亡。在进行细胞培养时应该注意消毒器

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问为什么包病毒的293细胞会缩，然后飘起来，病毒效价不好？

sswei

可能细胞状态不好，或细胞太密。

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问在细胞培养过程中总发生细菌污染怎么回事?

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因:操作技术不严格，试剂质量不达标，大气中孢子计数增加，培养箱或操作台使用和维护不当，污染了的冰箱和水浴锅。因此，在细胞培养过程中，操作者不仅要严格遵守标准的操作程序，同时还要特别注意新产品、新品牌、以及设备的清洁维护。

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问为什么细胞解冻后，活细胞占比较低?

huarenqiang5

出现低存活率的可能原因及解决方案如下：1.解冻过程中细胞裂解解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为106至107细胞/毫升。2.解冻过程中的问题解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的首选方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养。3.对冷冻液过敏解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在2

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问血清中的沉淀物对细胞培养有影响吗？

huarenqiang5

血清中的沉淀物对细胞培养没有影响。

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问间充质干细胞支原体污染后对细胞生长的影响？

huarenqiang5

支原体污染后对细胞的影响主要是:1.影响细胞的生长状态及形态。2.影响细胞的代谢和功能。

4 回答287 围观

问贴壁细胞转染48h，细胞会死亡，导致细胞数量不一致，怎么办？

汤姆卜丽波

一般转染试剂都会对细胞造成伤害，你可以适当调整转染试剂的浓度和时间

4 回答1014 围观

问请问胰酶的加量和消化程度怎么判断呢？消化多久呢？加全培中和的话比例是多少比较好？

huarenqiang5

胰酶加量略盖过细胞即可，一般消化时间在1－3分钟比较合适。

5 回答3591 围观

问细胞空隙之间有黑色点状物，多次传代之后仍然存在。请问这是什么？该如何去除?

sswei

1. 细胞碎片在细胞培养中不合适操作引起的化学或物理上的刺激，例如胰酶消化时间过长，会导致细胞死亡，从而产生很多碎片。2. 凋亡小体在体外培养条件下，细胞很容易受到环境改变的影响，诱发细胞的凋亡，产生凋亡小体。将细胞用 PBS 洗 2~3 遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去 PBS，消化时先加低浓度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右，让细胞间隙中的颗粒和

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问293T细胞生长速度不稳定是怎么回事？

sswei

293T细胞很不好养，细胞贴壁性不是很好，且消化的度不是太好掌握，操作时动作一定要轻。如果细胞状态不好的话，考虑添加点NEAA。就是有的时候操作可能动作大了点，细胞就会破碎，293系列的细胞基本上都是这个特性，刚复苏的时候贴壁较慢，可以在培养箱多放一天让它多贴壁。平时培养过程中贴壁较差，拍打或液体冲洗都可以使细胞脱落，所以消化时间很快，胰酶可以适当降低浓度，不要加EDTA了，基本上不要放到37度的

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