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科研学霸天团，48小时有问必答

问为什么我用再障患者骨髓血提的原代细胞长势很差？

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在再障患者的骨髓中，正常造血细胞的数量会明显减少，而癌细胞的数量则会增加。因此，再障患者的骨髓中的原代细胞生长受到了癌细胞的影响，其生长势可能会受到抑制，从而导致生长势较差。此外，再障患者的骨髓环境可能也发生了改变，造成细胞生长环境的不适宜，也可能会影响原代细胞的生长势。如果您在进行实验中发现再障患者骨髓血提的原代细胞长势很差，可以尝试以下措施来改善细胞生长情况：1. 改变培养基组成，尝试不同的培

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问培养增多人的软骨细胞具体操作方法及步骤

loveliufudan

当涉及到软骨细胞的具体培养方法时，以下是详细的步骤和操作：1. 细胞准备： - 从合适的来源（如人体骨骼或软骨组织）获得样本，通常需要手术或解剖获取。 - 将组织样本转移到含有生理盐水（PBS）的培养皿中，以保持组织的湿润。2. 细胞分离： - 用刀片或剪刀小心地将组织切割成小块，以增加细胞表面积。 - 将组织块置于含有消化酶（如胶原酶、DNA酶）的消化液中，通常在37摄氏度下进行

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问关于三次WB实验结果的统计学问题

loveliufudan

解决方案可能包括： 1. 增加重复次数：这可以提高你的统计效能，并可能帮助你在造模和加药挽救组中达到显著性。理想情况下，每组应该有至少3个以上的重复。 2. 对数据进行合适的统计分析：如果数据分布不均或者存在离群值，可能需要使用不同的统计方法。例如，非参数的统计测试如Mann-Whitney U测试或者Kruskal-Wallis H测试可以应对这类问题。 3. 在实验设计上做出调整：例如，改变药

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问贴壁，有木有哪位知道是什么细胞？我从心脏取血分离的PBMC的方式加的1640培养基和刀豆蛋白20ng/ml刺激的。

loveliufudan

可能是单核细胞在刀豆蛋白的刺激下分化成了巨噬细胞。

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问edu染色488和33342为什么会这样啊

loveliufudan

可能是由于几个因素引起的： 1. 荧光染料渗透：有可能你的HOECHST 33342不仅染色了细胞核，也染色了细胞质。这可能是由于渗透作用，尤其是在高浓度或长时间孵育的情况下。 2. 细胞固定和渗透步骤：固定和渗透步骤对荧光染料的进入细胞内部起关键作用。如果使用的固定剂或渗透剂不恰当，可能会影响荧光染料的分布。 3. 具体的抗体或标记物：对于你的488染料，可能你的目标抗原主要位于细胞膜，而不是细

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问请问hepG2细胞想做抗氧化都需要建立什么模型，我之前养巨噬细胞知道要建立炎症模型，那这个肝癌细胞要建立啥怎么去建立？

loveliufudan

在体外实验中，建立抗氧化模型常常使用一些氧化应激诱导剂来诱导氧化应激，然后检测细胞对这种应激的反应。在肝癌细胞HepG2中，常用的氧化应激诱导剂包括氢过氧化物（H2O2）、四氢喹啉醌（t-BHP, tert-butyl hydroperoxide）等。具体操作步骤大致如下： 1. 将HepG2细胞在适当的培养条件下生长到适当的数量和密度。 2. 添加氧化应激诱导剂，如H2O2或t-BHP，以诱导氧

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问THP-1细胞经过PMA诱导成M0后IL-1b分泌量很高

loveliufudan

对于你所观察到的IL-1β高表达的情况，有几个可能的解释： 1. PMA诱导的剂量或时间可能较高或较长，过度刺激了THP-1细胞，导致它们产生炎症反应。你可以尝试减少PMA的浓度或缩短处理时间，看是否能降低IL-1β的水平。 2. PMA自身具有刺激活性，可能会诱导细胞产生炎症反应。一些研究已经显示，PMA可以刺激细胞产生炎症细胞因子。 3. 如果你使用的是酶联免疫吸附试验（ELISA）或者其他类

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问请问悬浮细胞能做transwell实验吗，有具体protocol吗？

balalaLy

跟贴壁细胞大同小异（1）悬浮细胞最好在前一天进行饥饿处理（即无血清培养基过夜培养，以便增强细胞迁移能力）；（2）实验当天，收集细胞，离心去上清，用无血清培养基重悬，计数；（3）每组细胞的配制：每组 3 复孔。按照每孔 10^5 个细胞 / 200 μl 的量配制 4 个复孔的用量（多配 1 孔），即 4×10^5 个细胞 / 800 μl；（4）transwell 下室加入 700-800 μl

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问请问一下，DAPI染昆虫精子时，精子都缠绕在一起很难进行计数，应该怎么将其分散开

loveliufudan

昆虫精子缠绕在一起可能是由于精子的凝集，有一些方法可以试试看： 1. 淡化样品：你可以尝试将精子液进一步稀释，使精子密度降低，从而减少精子之间的相互作用和凝集。 2. 改变pH：精子凝集可能与pH有关。你可以尝试调整你的液体介质的pH值，看看是否能够影响精子的凝集程度。 3. 增加润湿剂：有些润湿剂可以阻止精子的凝集。然而，要注意这可能会影响你的染色或其他后续步骤。 4. 增加搅拌或振动：轻微的搅

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问为啥有些蛋白的WB是两条条带？

王堇文

1.可能你的蛋白有一定降解，分子量小的蛋白有时候出现这种情况几率比较好的。目的蛋白有部分降解，但是未降解部分依然可以和抗体结合2.可能是WB到了该蛋白的同源二聚体3.可能抗体有时候特异性不高会出现别的杂带

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问统计学上的F和p是代表啥意思。

feixue7758527w

统计学上F值是F检验的数值，F检验叫方差齐性检验，两个总体中抽取样本，然后进行比较。P值代表结果可信度，一般小于0.05属于有统计学差异，小于0.01属于有显著统计学差异。

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问dapi染核，胞质也有什么原因

王堇文

因为染料进入死细胞。其实染的就是细胞核。细胞死后膜通透性增加，dapi穿过膜进入细胞，将细胞核染色，显微镜调好的话，还是能看见细胞的胞质部分。

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问shRNA和siRNA的敲减效率问题？

是TTT

这是合理的，siRNA进入细胞后直接结合mRNA上互补序列，从而阻碍基因表达，而shRNA需要切割为siRNA才能发挥同样的作用

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问与自噬息息相关的微管结合蛋白轻链lc3和微管的关系是怎么样的？

loveliufudan

关于LC3和微管的关系，目前的研究认为微管在自噬过程中的主要作用是帮助自噬体的运输和定位，以及自噬体与溶酶体的融合。LC3虽然在自噬过程中起着关键作用，但其主要的作用并不在于直接与微管互作，而是标记和形成自噬体。然而，值得注意的是，自噬过程中的各种蛋白质相互作用非常复杂，可能还存在许多尚未发现的机制。例如，一些研究发现，有些微管关联蛋白（如HDAC6）可以识别并结合到LC3，进一步促进自噬体的运输

4 回答520 围观

问Edu检测中间哪几步可以暂停？（也就是时间延长）做实验鲁莽了实在不想半夜三点来做实验

dxyc42u

最好不要停顿，我们试过停顿的话效果不好

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问CHOK1细胞冻存，冻一个12孔板的孔可以吗

dxyc42u

可以的，如果冻存液好用的话就没问题

3 回答254 围观

问TGF-B刺激LX-2前，LX-2如何进行饥饿培养？继续使用高糖培养基？只有血清浓度改变了吗？

loveliufudan

对于LX-2细胞，饥饿培养的具体步骤可能是这样的： 1. 先将细胞在含有正常血清浓度（通常是10%）的培养基中培养至适当的细胞密度。 2. 然后用血清浓度较低（如0.5%或1%）或无血清的培养基替换原来的培养基，将细胞饥饿一段时间（如12到24小时）。 3. 在饥饿培养后，再添加TGF-β刺激细胞。关于培养基的糖浓度，一般情况下，高糖或低糖培养基的选择取决于你的实验目标和细胞类型。对于大部分的细胞

3 回答2219 围观

问tranwell求助染完色之后看不见孔也看不清细胞形态

balalaLy

黑色的那种颗粒状的应该是孔，是不是你的结晶紫染液溶度太高或者没有洗干净？

3 回答396 围观

问是污染吗？

相守RGXS

看样子像是污染，建议重新培养。

5 回答358 围观

问铁死亡研究为什么要测总铁水平？

huarenqiang5

因为铁死亡主要依据总铁水平变化来进行判断。

3 回答432 围观

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