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科研学霸天团，48小时有问必答

问sf9细胞进行杆状病毒（杆粒）转染，需要注意哪些？

loveliufudan

在使用SF9细胞进行杆状病毒（Baculovirus）转染时，以下是一些需要注意的关键点： 1. 细胞培养条件：确保SF9细胞在转染前处于健康、活跃和适当的生长状态。细胞培养基的配方和培养条件应符合SF9细胞的要求，如适当的培养温度（通常为27-28°C）和培养时间。 2. 转染载体和病毒：选择适当的转染载体（如质粒DNA）和杆状病毒背景，以实现所需的蛋白表达。确保转染载体包含目标基因的正确构建，

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问家人们，用台盼蓝测细胞密度的时候机器显示死细胞98%，活细胞只有2%，明明可以贴壁生长，到底哪一步出问题了呢？

loveliufudan

是不是检测方法有问题，如果使用不正确或不适合的染色方法，可能会导致误判。

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问sf9昆虫细胞对数生长期时的细胞密度怎样才能知道？sf9刚复苏培养F1代细胞悬浮的细胞是死亡的细胞还是部分悬浮细胞？

土井挞克树

sf9刚复苏培养f1代细胞是部分悬浮细胞，并不是全部死亡

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问感觉细胞养一段时间就长得慢了是什么原因呢？

feixue7758527w

这个就跟树木一样，空间有限，细胞爬满了就没有地方，营养也会不足，所以就会生长变慢，所以实验一般都在对数生长期进行实验的。

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问THP-1细胞诱导成M0细胞再诱导成M2细胞，如何进行消化呢？

loveliufudan

对于THP-1细胞，酶消化可能不是最适合的方法。您可以尝试使用细胞刮取的方法，使用细胞刮片或细胞刮棒轻轻刮取细胞以实现细胞的离解。

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问求助大佬，已知一个基因，数据库预测其靶向的miRNA，PCR实验，靶基因和miRNA在实验组都是过表达，这个miRNA能继续吗

feixue7758527w

我觉得还是可以继续的，既然都是过表达，说明这个基因还是有特点的，可以进一步研究看看的。后期可以敲低表达看看的。

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问请问各位大神，抑制剂梯度处理细胞时候DMSO对照组应该怎么设置呢？

loveliufudan

DMSO对照组的设置通常是将DMSO单独作为一个组进行处理，以评估DMSO本身对实验结果的影响。这样可以比较其他药物组和DMSO对照组之间的差异。在药物梯度处理细胞时，DMSO对照组可以选择与最高浓度的药物处理组体积相同的DMSO体积。这样可以保持处理组和对照组在处理液体积上的一致性，从而更好地比较它们之间的效果差异。需要注意的是，高浓度的药物相对于低浓度的药物可能更容易析出，但在实验设计中，我们

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问孵育后是否换液？学弱很急

feixue7758527w

一般预处理后就要把药物去掉的，就是把含药的液体吸掉，然后进行下一步处理的。

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问能不能用DMSO配置不同浓度的药物注射到小鼠腹腔？

balalaLy

以高剂量40mg/kg/day为例，假设小鼠体重20g,那么每只小鼠每天的给药量是0.8mg,药物最大溶解度30mg/ml，为了方便计算，你可以配置成20mg/ml的工作液，那么每只动物每天的给药量是0.8mg除以20mg/ml约等于40ul,即取40ul的工作液。同理，中剂量取20ul,低剂量取10ul工作液，但是又要确保所有组别的给药的体积要一致，所以，高剂量组是取40ul工作液+60ul生理

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问细胞实验如MTT.WB.pcr 实验如何设置复孔？测几次？同一天测吗？组织中的染色实验，重复有没好建议

sswei

96孔板的实验，比如MTT，luciferase reporter等实验室，单次至少3个复孔，需要至少3次独立重复实验（肯定不是一天做的）。WB实验，收样的时候可以不用做复孔，分装蛋白的时候可以分几份跑胶，也可以就跑一次。但是结果至少重复3次（三批的样本）保证重现性。PCR实验，收样的时候不需要复孔，但是p的时候至少设置3个复孔，且至少3次独立重复实验，也就是说等收三批以上的RNA样本。

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问这里的等量是指什么？等体积？还是等浓度。等质量？

feixue7758527w

之前描述已经说了，每次0.2ml，所以这里的等量就是等体积的，也就是0.2ml的。

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问红色和绿色处什么意思？

feixue7758527w

我觉得这个可能尽量减少H2O的用量，因为标准是小于0.1的。你说的对的，每毫升里面加12.5mg该药品的。

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问动物实验分正常对照，模型，和低中高剂量药物组。

balalaLy

所有组加的pbs体积都应该一致，只是药物组的药物剂量按照低中高的剂量，但体积都要保持相等。

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问肌腱，肌肉取材后放多聚甲醛和放液氮有什么区别吗？

feixue7758527w

原则上放多聚甲醛就是固定，把肌肉组织固定在当前时刻，对于细胞形态组织形态都是很好的。放液氮主要就是速冻，对于形态不太好，但是能保存细胞存活，解冻后还是可以培养细胞的。

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问一般细胞冻存冻存液只用胎牛血清可以么

sswei

传统细胞冻存液是向培养基中加入保护剂，一般是10%二甲基亚砜（DMSO）和10%-90%的牛血清。

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问怎样在显微镜下判断贴壁细胞生长状态的好坏

sswei

把培养瓶放入显微镜下观察,培养液中无杂质（可能是细胞死亡破裂）、细胞无悬浮或微量悬浮、细胞饱满透明.视野中贴壁细胞贴壁均匀.观察到这些就说明细胞生长很好了

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问坐标郑州，跪求跪求食管癌TE13细胞！！！我这有KYSE30、KYSE70、Eca109、KYSE150、TE7可以换！球球了！

土井挞克树

我们实验室有，可以有偿提供TE13细胞

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问请问一下，使用DMSO溶解的药物，在对培养的细胞进行处理时，选择怎样的阴性对照？

dxyc42u

追加两组阴性对照，细胞的这组+DMSO，还有细胞组什么也不加。

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问求助各位看看这是贴壁的猪肠上皮细胞吗

dxyc42u

是猪上皮细胞，图中圆形的是还没贴壁的

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问（不同浓度R皂苷、oxLDL 、细胞凋亡）～如果用DMSO溶解的话，是不是应该有一组DMSO对照？

loveliufudan

是的，就像以下这样分组：A组：只有细胞的对照组，即仅添加培养基或适当的控制液体，没有添加R皂苷或DMSO。B组：溶酶对照组，将DMSO加入细胞培养基中，但不添加R皂苷。C组：oxLDL组，使用液体（非溶液形式）的oxLDL处理细胞。D组：不同浓度的R皂苷处理组，使用DMSO溶解R皂苷后，将其加入细胞培养基中。对于浓度的稀释，具体的实验设计应该根据您的研究目的和实验要求来确定。您可以选择一系列不同浓

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