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科研学霸天团，48小时有问必答

问液体怎么进行显微镜制片两次染色怎么操作

土井挞克树

将待测藻液通过稀释或离心浓缩，调整OD值至0.15左右，与终浓度为0.05μg/ml-1μg/ml的BODIPY荧光染料和终浓度为0%-40%的DMSO混合后，在25℃-60℃温度范围内，避光染色10min，选择400-600nm作为激发波长，测定在发射波长450-700nm之间的荧光强度，荧光强度与藻细胞中油脂含量呈正相关，可用于进行相对或绝对定量

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问栅藻判别死活 SYBR green I和PI共同染色可以么

huarenqiang5

可以，栅藻可以判别死活SYBR gree I和PI共同染色。

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问H9C2心肌细胞培养问题

土井挞克树

现在的细胞密度过小，建议增大密度，目前看来不需要重新培养，可以再观察看看

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问为什么分离培养骨髓间充质干细胞第一代细胞不生长，长的很稀很慢，怎么提取能加大密度，去除杂细胞呢？

loveliufudan

有几个可能的原因以及相应的解决方法： 1. 初始细胞密度不足：确保在分离BM-MSCs时使用足够数量的起始骨髓细胞。增加初始细胞密度有助于提高细胞生长速率。可以尝试使用更多的骨髓细胞或使用较小的培养表面积来增加细胞密度。 2. 细胞营养物质不足：提供足够的培养基和营养物质对细胞的生长非常重要。确保培养基配方正确，包含适当的营养物质，如培养基、血清、生长因子等。 3. 培养条件不适宜：BM-MSCs

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问梅雨季节，怎么防止支原体污染？

loveliufudan

以下是一些防止支原体污染的常用方法： 1. 严格的无菌操作：在实验室中进行严格的无菌操作，包括使用无菌技术和消毒实验台、操作器具和培养皿。确保培养物和培养液都不受外界环境的污染。 2. 经常更换培养基：定期更换培养基可以减少细菌和支原体的增殖。培养基中添加适量的抗生素，如青霉素和链霉素，可以预防细菌和支原体的污染。 3. 定期检测和筛查：使用特定的检测方法，如聚合酶链式反应（PCR）或荧光染色等，

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问贴壁细胞爬片问题，同一批细胞，同时爬片，一共爬了6个孔，三个孔贴壁了，三个孔一点都没有贴壁，如下图所示，这是什么原因呢？

dxyc42u

如果不贴壁了，可以考虑包被下。

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问胰酶消化或者pbs洗涤会影响DC2.4细胞成熟吗？

dxy_xextz7w2

胰酶消化一般不会影响细胞成熟，但是注意消化时间不要过长，pbs洗涤也不会影响，它只起到期“清洁”和缓冲的作用

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问原代嗅鞘细胞可不可以传代，传代了会怎样

dxyc42u

可以传代，但是只能传几代没法传多了

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问判断细胞死活，并计数死活细胞数量最恰当的方法

mistll8

一般用细胞技术法精确一点的话用流式

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问美天旎磁珠分选盒 CD45R、CD19阳选，和CD43 (Ly-48)阴选盒子所得细胞群来源差异大吗

土井挞克树

差不太多，得到的都是双阳B的分选细胞

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问脂肪细胞油红O染色，为啥油红O试剂盒和配置的油红O粉末染的细胞颜色不一样呢？油红O粉末应该怎么配呀～

行而上学不行

油红O1g，异丙醇100ml，使用时以油红o饱和液一份加蒸馏水两份，过滤后使用

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问鼠来源的神经干细胞该如何提取原代细胞及培养好呢？

loveliufudan

具体步骤：新生鼠使用眼科剪将动物断头，并用镊子剥除头部的皮肤。在冰D-PBS液中沿颅骨人字缝从后向前剥离。一般左手持弯镊，在动物两眼处以适当力度固定；右手持直镊，完成剥除皮肤、骨骼以及分离组织等工作。在显微镜下利用精细器械分离皮层或海马时，沿皮层边缘以45°角小心划开，并逐步使之剥离，转移组织入盛有冰D-PBS液的35mm小皿中；然后用精细器械仔细去除每个皮层或海马的脑膜（整个过程需要在低温冰袋上

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问关于BMDC流式鉴别

loveliufudan

你提到的实验方案基本上是可行的，可以用于鉴定骨髓来源的树突细胞。你选择了一系列抗体来标记树突细胞的特定表面标志物，这可以帮助你识别和分析这些细胞。你选择的抗体组合如下： 1. APC/Cyanine7 anti-mouse CD11c抗体 - 用于标记CD11c表面标志物，这是树突细胞的常见标记物。 2. APC/Cyanine7 Armenian Hamster IgG同型对照抗体 - 用于作为

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问神经元缺氧缺糖模型怎么判断造模成功

loveliufudan

在神经元缺氧缺糖模型中，判断造模成功可以根据以下几个方面进行评估：1. 细胞形态变化：缺氧缺糖条件下，神经元通常会发生形态上的变化，如细胞体肿胀、轮廓不清、突起消失等。通过显微镜观察和比较缺氧缺糖组与对照组的细胞形态变化，可以初步评估造模成功程度。2. 细胞存活率：缺氧缺糖条件会导致细胞死亡，因此可以通过细胞存活率来评估模型的成功程度。常用的方法包括细胞计数、细胞存活染色剂（如Trypan blu

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问RAW264.7细胞培养出现大细胞是什么原因呢？

sswei

可能由于细胞刚刚复苏，不很适应，比较脆弱，而造成细胞突变，建议加大血清，继续培养观察一段时间。

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问这个n=10是什么意思？

dxy_w0bqu5c9

n=10是指每一组的数量有10只

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问Transwell实验下室可见大量细胞穿出但是染色却看不到明显的细胞的原因

晓雨知春来

有可能是小室的膜孔径大于细胞直径，导致细胞漏下去了。

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问请问怎么找到我这个基因家族在所有绿色植物，比如低等植物到高等植物中全部的基因呀

sswei

可通过phytozome（JGI）数据库进行查找。

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问耐药细胞株药物刺激的时候，细胞长得很快。但是刺激时间都没一半，这个时候可能传代吗？

feixue7758527w

最好不要传代，这样做，会容易影响实验结果的，而且传代细胞不稳定，也容易影响结果。建议下次种板子，种的细胞少一点的。

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问核蛋白提取后，做Wb。是否也需要BCA定量核蛋白？配平？

土井挞克树

需要的，做wb之前需要进行bca定量核蛋白

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