实验问答21,991,354 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问提取组织线粒体做western

土井挞克树

操作步骤：1.提取线粒体后，蛋白定量，与线粒体保存介质（主要成分蔗糖、Tris）混匀-20度冻存。2.将分装线粒体取出融化后，加上样缓冲液混匀。3.100度水浴5分钟，取出立即置于冰上。上样，每孔150微克蛋白。4.5%浓缩胶，80伏电压，12%分离胶，110伏电压跑电泳。

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问玻璃培养皿灭菌的标准操作是什么

此用户已注销

1培养皿洗净后应烘干或晾干，之后按每5-7套用牛皮纸或报纸包好，也可装载大饭盒或特制的盒内，即可进行灭菌。2/6移液管洗净后也应烘干或晾干，在口吸的一端用尖头慑子或针塞人少许脱脂棉花，以防菌体吸人口中或口中的微生物吹人吸管而进人培养基内造成污染。3/6塞棉花要适量（长约1cm，松紧适度），塞好后用酒精灯火焰将外露在管口的棉花烧除，然后用4-5cm的报纸条，以45°角螺旋形将每根移液管分别卷好（需

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问UV造模的时候，细胞需要将完全培养基换成无血清培养基或pbs吗，对照需要换吗，照射完是否需要放到培养箱继续培养24h后再测活力。

loveliufudan

对,制作细胞模型时,通常需要将完全培养基更换为无血清培养基或PBS,以减少营养因子的影响。对照组也需要进行相同的操作,以保证实验条件一致。照射后,最好将细胞继续培养24小时,然后再进行活力测定实验。具体操作步骤如下:1. 将细胞以适当密度接种在带有完全培养基的培养皿或培养瓶中,培养过夜。2. 当细胞融合度达到70-80%时,吸掉完全培养基,用PBS轻轻洗涤2-3次。3. 在对照组和实验组中分别加入

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问1-2mmol/L的薄片是什么意思呢

loveliufudan

举例来说:1. 如果是1-2mmol/L的钠离子溶液,表示在1升这个溶液中,包含1-2毫摩尔的钠离子。2. 如果是1-2mmol/L的蛋白质凝胶薄片,表示在制备这个凝胶薄片时,使用的蛋白质样品的浓度在1-2mmol/L。3. 如果是1-2mmol/L的药物溶液渗透到薄片中,表示这种薄片中每升含有1-2毫摩尔的该种药物。

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问怎么样将载体的启动子完整的切下来又将目的基因的启动子无缝克隆到载体上

土井挞克树

先用特异性内切酶进行切割，然后用dna连接酶进行连接

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问请问如果在基层患者心电图提示ST-T段改变伴心悸这种情况，需要立即上送吗

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出现ST段改变，处理措施具体如下：1、如有明显的变化是严重的；2、如果病人有一定的临床症状，比如胸闷、心慌，而且胸闷时伴有头晕等症状的情况下，结合ST-T改变；如果发病时有明显的ST段下移提示有严重的血管狭窄，持续时间越长，病人症状下移的程度越深，伴随有病人的症状持续，说明有严重的冠脉狭窄，需要进一步就诊，住院做冠脉造影检查，必要时做支架治疗；3、部分病人ST段抬高，比如病人发病时有明显的T波高尖

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问小鼠肺泡灌洗液瑞氏-吉姆萨染色

dxy_91wmds88

细胞膜有不规则刺突，考虑细胞涨破影响染色效果，导致最后核的形态不是很清晰

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问细胞免疫荧光去培养基开始用PBS洗时，没有undefined5min，就单纯冲洗三次会不会有影响

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如果没有三到五分钟单纯冲洗还是有影响的

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问Hepg2可以作为可以作为体外研究的人正常肝细胞使用吗？利用lps 诱导构建炎症模型使用？

loveliufudan

关于HepG2细胞在肝病模型研究中的应用,有以下观点:1. HepG2细胞是目前常用的人肝癌细胞系,能表达多种肝脏特异性基因和功能蛋白,可作为体外人肝细胞模型进行相关研究。2. 但需注意,HepG2毕竟是肝癌细胞,与正常人肝细胞有一定差异。使用HepG2建立的模型可能无法完全反映正常人肝细胞的生理功能和病理状态。3. 利用iPSC技术诱导分化得到的肝细胞可能更接近正常人肝细胞,可以作为理想的体外肝

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问怎么把基因的启动子克隆下来呀

搬掉生物这块砖

根据发表的基因组序列，找基因ATG前2000bp，设计引物，使用物种基因组DNA为模板，PCR

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问细胞培养的生长过程有哪些阶段？

loveliufudan

细胞培养的生长过程通常可以分为以下几个阶段:1. Latent phase / Lag period 潜伏期这是细胞接触新环境后,准备适应环境的阶段。细胞会发生一些生理生化改变,但不会有明显的增殖。2. Log phase 对数增长期细胞开始快速增殖和分裂,呈指数增长。这时细胞群体数量以指数级增加。3. Stationary phase 稳态期当营养消耗和代谢废物堆积时,细胞增殖会放缓。细胞数量

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问构建过表达载体克隆这一步就卡住了怎么办

汤姆卜丽波

你要先明确你的目的片段大小然后选择合适的载体质粒，和内切酶，具体哪一步有问题可以细致的问，实在不行提供基因给公司让公司合成

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问开题报告是要写哪些内容呀

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选题背景和选题意义。选题与时代发展、社会状况的关系。研究这个选题的目的和价值。文献述评。研究内容。指论文拟研究解决的问题。研究思路、方法和技术路线。模型建构、参考文献和写作进度。

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问过表达的原理是什么呀？过表达最后得到的是基因上调吗

dxy_xextz7w2

基因过表达是指在目的基因上游加入调控元件，使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译，从而实现基因产物的过表达。基因过表达的机制很复杂，包括基因突变、DNA甲基化、组蛋白修饰等多种因素。过表达之后目的基因的表达是上调，而受目的基因调控的基因需要和没有表达目的基因的体系进行对比，一般是相反的趋势

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问为什么做进化树会显示这个做不出来呀

huarenqiang5

考虑可能是网站会将系列变成反向互补的系列。如果我们建树的系列是从Ncbi上下载来的。那么，目的系列最好也从网上下载。或者将提交的系列版相互补一下，再尝试建树试试。

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问同源重组的原理是什么呀同源臂是什么呀？为什么同源重组的酶可以不用考虑目的片段上有没有呀

汤姆卜丽波

同源重组又称一般性重组。同源重组发生在DNA的同源序列之间，通过配对、链的断裂和再连接，而产生片段交换的过程，是最基本的重组方式，同源臂是指两个DNA片段之间的相似性，主要是因为有同源序列，所以不同考虑目的片段

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问pcr的原理是什么呀有可以详细讲解一下的嘛

汤姆卜丽波

在存在DNA模板、引物、dNTPs、适当缓冲液 (Mg2+) 的反应混合物中，在热稳定DNA聚合酶的催化下，对一对寡核苷酸引物所界定的核酸片段进行扩增，这种扩增是以模板DNA与引物之间的变性、退火、延伸三步反应为一个周期，循环进行，使目标DNA片段得以扩增。

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问各位老瑞氏-吉姆萨染色如果用浸染的方式应该怎么操作呢

汤姆卜丽波

手工步骤是 ①滴加姬姆萨染色液A液（0.5〜0.8ml）于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂片染色1分钟；②将姬姆萨染色液B 液滴加于A液上面（滴加之量为A液的2 ~3倍）以洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3〜10分钟； ③水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上）；④干燥，镜检。你要浸染的话可以取一部分AB液出来，这样不怕污染母液

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问小鼠肺泡灌溪液用瑞氏吉姆萨染色液染一直染不好，染色时间都在试剂说明书基础上做了调整，但细胞胞核颜色总是偏深，有染的好的吗

huarenqiang5

考虑肺泡灌洗液重悬液的细胞浓度过大或有核细胞太过密集或PH偏碱导致。建议不改变浓度可以尝试推片制片，然后分别在低倍镜，高倍镜或者油镜下观察和分类细胞。

4 回答1597 围观

问SA-β-gal染色求助

huarenqiang5

SA-β-gal染色不需要在超净台完成，在普通的实验室完成即可。是的，加了固定液后就可以不要求无菌了。可以用烘箱孵育染色。

4 回答1383 围观

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