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问
免疫荧光可以染两种抗体吗?
dxywode
当两个抗原都表达在胞浆中,行免疫组化双染时染色容易相互覆盖。此时可以用免疫荧光双染,当然可以在同张片子上进行,具体操作时先使用一种荧光进行着色后立即拍照,然后等荧光消失后再染另一 种荧光染色,选择相同视野拍照,这样也有说服力的。
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问
做小鼠细胞因子测定实验后多久抽血比较好
txs900416
一般在损伤高峰测,比如Con A注射的小鼠,肝损伤在8-12h,这期间收是没问题的。测血清中细胞因子主要是要检测试剂盒的检测限足够灵敏,另外要每次设置阳性阴性对照,这样可以有效进行比较。
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问
nk细胞上每个受体的功能怎么研究
yfcwyh
NK细胞的三重武功:自身受体、ADCC、CAR-NK,目前用于肿瘤免疫治疗的NK细胞策略有:体外活化的自体或异体NK细胞治疗;联合NK细胞和单抗药(如免疫检查点抑制剂)来诱导抗体特异的细胞毒性;构建CAR-NK细胞免疫疗法。
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问
苏木精染色怎么配置?成品试过了,感染背景过厚
郭郭的郭郭
Gill改良苏木素(进行性染色):配制时, 先将2g苏木色精溶于250ml无水酒精,再将17.6g硫酸铝溶于750ml蒸馏水,然后两液混合后加入0.2—0.3g碘酸钠,最后加入15—25ml冰醋酸。此溶液为半氧化进行性苏木素液,不会产生沉淀,氧化膜少。常有人配制此液染不上色或染色较慢,可能是碘酸钠量的原因,可根据气温变化多加一点(气温在30℃时,一般碘酸钠量为0.25g,气温每降低5度,可增加0.
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问
免疫荧光中荧光信号无细胞形态是什么情况?
dxy_8y6odnaq
封闭时间不够或浓度不够都有可能 导致一些抗体非特异性吸附 另外在染色过程中需要保证湿润的环境 否则也会影响染色
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问
请问流式细胞术染CD4 CD8 CD3的时候能否先固定,再染色?
dxywode
标本采集后要及时固定或深低温保存,以免组织发生自溶,DNA降解,而造成测试结果的误差。
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问
免疫组化什么表现会出现假阳性结果? 抗体是既往文献中使用过的抗体,纯度应该没问题,染色较深,该分析有无假阳性可能吗
txs900416
一般假阳性出现在pbst洗得不够干净,抗体特异性不够好,组织背景高,曝光时间过长等。建议做一张只染igg的isotype以区分是否为假阳性
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问
免疫细胞marker标记及panel确定
颜渊溪桥
如果你主要分析肿瘤样本中的免疫细胞群体,建议肿瘤组织研磨后percoll一下,下层70%,上层40%,离心后最上层是肿瘤细胞,中间是淋巴细胞,底部是死细胞。然后在去测淋巴细胞的胞内因子准一些。如果只染表面,可以不用percoll,但染色封闭处理一下对巨噬及DC等要好一些。
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问
胰腺组织样本如何处理?
郭郭的郭郭
胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等。 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了。
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问
用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白,两者操作过程有哪些不同?
小暮
原理都是一样的,就是固定方式不一样,细胞固定多用甲醛,组织切片固定多用多聚甲醛
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问
大家好,请问细胞的免疫荧光过程中,涉及到GFAP的染色,破膜的影响大吗?在抗体稀释液中是否添加triton以及合适的比例呢?
dxy_cnbwb4m9
破膜在IF中是必要的 你需要控制好时间和tritonx100浓度。一般protocol是室温10分钟0.5%浓度,你可以参考一下 然后适当降低时间和浓度 如果条件太剧烈就会看到细胞膜破洞
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问
流式实验的时候FCblocker 和FVD活性染料哪一个应该先放。
peaceful13
先染FVD死活,因为这个是染料会跟蛋白或者抗体结合,所以需要在无蛋白的缓冲液进行染色,Fcblocker主要成份刚好就是蛋白或者抗体,所以需要先染死活
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问
通过染色进行的细胞分选一直不太成功 请问注意事项?
Kimser
样品应保存在最适合它们的富营养培养基中。一般建议血清浓度尽量高一些,因为在分选过程中,血清浓度会被收集到管中的鞘液稀释。收集管尽量保持在最佳温度,并含有用于保存细胞活力的培养基。在分选完成后尽快处理分选后的细胞有助于保持细胞活力。
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问
双荧光染色标记后细胞流式实验以及结果分析需要的注意事项?
府宅
每次试验均需设置以下三种对照: (1) 阳性对照:阳性血清+荧光标记物; (2) 阴性对照:阴性血清+荧光标记物; (3) 荧光标记物对照:PBS+荧光标记物。
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问
免疫荧光染色背景过亮该如何改进?
府宅
封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合,减少背景染色。如果背景太强,可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间
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问
破膜固定处理后的细胞还能上流式细胞仪进行细胞分选吗?死活染料能区分在破膜固定前的死活细胞吗?
小小袋袋
细胞分选和破膜固定理论上不冲突,我觉得死活染料可以区分,但需要注意荧光是否会影响后续实验
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问
细胞复苏之后不贴壁
biu2266
复苏血清浓度要提高,细胞密度最好增加
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问
关于细胞冻存 DMSO 浓度
生物技术学生
冻存时细胞浓度是关键,要是细胞浓度过低,因为冻存后会有很多细胞死掉,所以要多一些细胞复苏时容易长起来,我们也样 G2 和 60,我们用的是纯血清或者完培加终浓度为 10% 的 DMSO 后,直接放到 - 80 冰箱里都可以复苏我的完陪 + 20%FBS+10%DMSO, 存活率和绝对活细胞量都很低,有的全死。冻存的细胞量和浓度都很大的
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问
保存细胞的细胞冻存管在使用之前需要灭菌吗?
赵小叶
冻存管没有开封之前应该都是无菌的哦 如果盖子开了就别用了吧 不能高压灭菌重复使用
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问
有关细胞冻存后 - 80℃保存的问题
biopic
老老实实按照标准操作,存液氮里面。就不会出这种问题。
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