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流式实验的时候FCblocker 和FVD活性染料哪一个应该先放。
peaceful13
先染FVD死活,因为这个是染料会跟蛋白或者抗体结合,所以需要在无蛋白的缓冲液进行染色,Fcblocker主要成份刚好就是蛋白或者抗体,所以需要先染死活
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问
通过染色进行的细胞分选一直不太成功 请问注意事项?
Kimser
样品应保存在最适合它们的富营养培养基中。一般建议血清浓度尽量高一些,因为在分选过程中,血清浓度会被收集到管中的鞘液稀释。收集管尽量保持在最佳温度,并含有用于保存细胞活力的培养基。在分选完成后尽快处理分选后的细胞有助于保持细胞活力。
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问
双荧光染色标记后细胞流式实验以及结果分析需要的注意事项?
府宅
每次试验均需设置以下三种对照: (1) 阳性对照:阳性血清+荧光标记物; (2) 阴性对照:阴性血清+荧光标记物; (3) 荧光标记物对照:PBS+荧光标记物。
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问
免疫荧光染色背景过亮该如何改进?
府宅
封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合,减少背景染色。如果背景太强,可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间
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问
破膜固定处理后的细胞还能上流式细胞仪进行细胞分选吗?死活染料能区分在破膜固定前的死活细胞吗?
小小袋袋
细胞分选和破膜固定理论上不冲突,我觉得死活染料可以区分,但需要注意荧光是否会影响后续实验
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问
细胞复苏之后不贴壁
biu2266
复苏血清浓度要提高,细胞密度最好增加
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问
关于细胞冻存 DMSO 浓度
生物技术学生
冻存时细胞浓度是关键,要是细胞浓度过低,因为冻存后会有很多细胞死掉,所以要多一些细胞复苏时容易长起来,我们也样 G2 和 60,我们用的是纯血清或者完培加终浓度为 10% 的 DMSO 后,直接放到 - 80 冰箱里都可以复苏我的完陪 + 20%FBS+10%DMSO, 存活率和绝对活细胞量都很低,有的全死。冻存的细胞量和浓度都很大的
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问
保存细胞的细胞冻存管在使用之前需要灭菌吗?
赵小叶
冻存管没有开封之前应该都是无菌的哦 如果盖子开了就别用了吧 不能高压灭菌重复使用
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问
有关细胞冻存后 - 80℃保存的问题
biopic
老老实实按照标准操作,存液氮里面。就不会出这种问题。
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问
细胞冻存液是否对细胞贴壁有影响
好假哟00
不知道你复苏培养使用什么规格的瓶子,因为商品化冻存液中应该也有 DMSO,对细胞影响较大的也是这个成分。足量的稀释可以降低他的毒性。
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问
细胞冻存液污染了,细胞怎么办
Doctor高1
如果冻存液污染,那你冻存的细胞肯定也被污染了,只能丢弃,因为污染的细胞你花时间金钱去补救,结果都差强人意
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问
如何比较不同实验组蛋白的岩藻糖基化水平
dxyhsx123
可以做质谱啊,这个是目前比较多的,经费充足,质谱带你起飞。
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问
如何快速定位污染的方法?
丁香实验
靠近风口的位置,还有就是有水的地方永远是首要排除的位置。重点怀疑水浴锅和培养箱内的水盘是不是有细菌/霉菌滋生。还是要事先做好细胞实验室布局设计,优化和规范细胞操作流程,提前查缺补漏,才不至于发生污染后,无从下手找到原因。
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问
细胞培养背景发现移动的小点,是细胞污染?
SJ多可爱
有可能是细菌污染吧?后期培养液浑浊了吗?题主:没有浑浊,现在查了很多,还是怀疑黑胶虫污染,使用了黑胶虫清除剂好了很多 使用黑胶冲清除剂后期还能见到会动的小黑点吗? 题主:会少些,一旦停用就又会有 我养的时候,细胞密度长到接近百分之90的时候,就基本上很少见到黑点,不影响细胞状态,没啥问题,细胞增殖没有问题,形态也没有问题,不必太在意这个黑点的,我见过好多养细胞都有这种会动的黑点,细胞生长不受影响,
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问
细胞污染及解决方法
yj1984ren
这两张图到处都有了,结合楼主提到的细沙样,就要考虑细菌污染了。
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问
关于THP-1细胞培养问题(悬浮细胞自行贴壁)
丁香实验
我的thp-1前一段时间也出现了类似的问题,当时除了这种细胞,别的细胞状态也不太好。怀疑是污染了。纠结了很久,后来把那一批细胞都扔了,培养液的瓶子也换成了新的(实验室自己配的培养液,自己备瓶子装),复苏了新的细胞。现在thp-1细胞状态很好,背景干净,长的也很快。建议楼主有冻的细胞就复苏新的吧。状态好的时候多冻些——后面细胞状态可能是您手法问题(主要是血清问题最重要,您列的血清应没问题,要是黄色的
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问
磁珠分离时出现堵柱现象怎么办?
pppeachya
细胞悬液用 300 目滤网过滤一次,过柱前重悬细胞时再加大液体体积试试~
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问
CD25磁珠分选纯度很低的原因,如何处理?
莹啊免疫啊
可能是磁珠的特异性不够或者量不够,或者是你是两个一起分选的还是分步分选的,一起分选的话,CD4+本身可能就带了一些25+和25-导致结果不好?个人推荐可以试试流式分选,多重筛选还挺省事的。
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问
先阳选磁珠分选CD4+T细胞后,下一步如何分选CD4+CD25-T细胞?
半两月光
最近刚做了一次,我用的是美天旎的kit,先阴选CD4阳性细胞,再标CD25抗体,阴选出来的就是CD25阴性细胞,纯度还挺高的,一定要用它推荐的柱子,否则纯度不高
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问
分选后共培养会有影响么?MLR怎么做?
西柚味的芋圆
磁柱本身是不带磁性的。 2、T细胞需要新鲜最好 3、有IL-2可以,没有也行,T细胞培养基中最好有2-ME
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