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科研学霸天团，48小时有问必答

问大鼠胎鼠脑原代细胞纯化？

dxy_gwrp7ndq

用神经干细胞特异性抗体———巢蛋白(Nestin)鉴定克隆细胞,用特异性的单克隆抗体鉴定克隆球诱导分化后的细胞。可获得了大量自我增殖并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的神经干细胞。

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问如何分离到纯的神经元细胞？

天一湖医者

实验材料母鼠试剂、试剂盒 BSS仪器、耗材无菌器械显微镜实验步骤 1. 杀死怀孕 18 天母鼠（常用过量 CO2 使其窒息），用无菌器械取出胚胎，放在无菌的培养皿中。 2. 取下胚胎的头，放在盛有 4 ml 不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的平衡盐溶液（BSS）的培养皿中。 3. 从头颅骨上取下脑，放在 35 mm 培养皿中的 BSS 液滴上，培养皿中半装满 Paraplast（Sigm

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问求助：钛片上培养成骨前体细胞想做活死细胞染色，应该用什么显微镜呢？共聚焦显微镜还是正置荧光显微镜呢？

府宅

可以使用正置荧光显微镜观察细胞情况

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问显影液会不会放久了效果变差？大概大半年的样子

bamboopiggy

只要你不把a液和b液混了，放四度避光保存用个1-2年没问题，就是千万注意，最好用不同的枪尖吸a b 液

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问提取的原代骨髓源性巨噬细胞能传代使用吗？

bamboopiggy

不能传代使用，需要诱导7天，才能做实验

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问A549细胞转染质粒效果差，如何提高转染效率？

府宅

A549细胞可以用RFect小核酸转染试剂，有国际专利的，转染效率可以做到90%以上，而且细胞死的也比较少。

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问原代细胞培养的相关注意事项

未来9

1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，它们之间会互相影响，在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。如果接种的细胞密度过低，细胞之间的促生长作用很小，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。　　2）适当增大原代培养接种的细胞密度，给培养的细胞提供更

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问蜱组织伊红染色1s着色，酒精洗不掉，蒸馏水浸泡也不褪色。

bamboopiggy

1.降低一下伊红的浓度。2.用盐酸乙醇洗就会褪色。

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问CsCl密度梯度离心，上层2ml是混合藻液，下层4ml是单一浓度的CsCl，为什么我的结果是密度大的藻在上面，密度小的在下面？

dxy_up0pfng

你好，请问你用的多大浓度的氯化铯呀，对藻细胞有影响吗，藻细胞会破裂吗

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问请问用有角度的转子对密度梯度离心有什么影响？

bamboopiggy

个人感觉是都可以用，只要你按照机器的参数调好，其实有角度的转子比水平的转子我感觉好用。

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问组织块培养皮肤成纤维细胞

bamboopiggy

尽量把组织切小块，等爬出的细胞在皿底融合即可。

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问原代细胞传代后出现杂质

天一湖医者

黑点的出现可能与以下几种情况有关： (1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸; (2)血清质量不好，反复冻融的结果; (3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长; (4)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

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问铺板细胞聚集在中间是为什么呢，如果用这样的板转染会咋样呢？

whilt-shirt

铺板后需要画8字，不管横8或者竖8，如果细胞未铺匀会影响转染效率

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问蛋白条带的问题求助，各种有问题的条带

喵喵喵柏

不知道你具体的问题是什么第一张图的右下角你应该是有一个气泡，所以条带上面有一个小白点如果你的问题是他不是单个的条带，有很多条带的话，需要看一下你的抗体是不是多克隆的剩下的几个你可以调整一下，把背景跟条带的对比度调的大一点最后两张膜你应该是发光的时候折了一下膜，膜上有折痕就会出现这种印记

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问qRT-PCR结果中复孔的cq值相差多少不可用？

cxsm

对于含量较高的基因来说，个人认为能接受0.5以内的差值吧，一般32个循环以后的基因，基本可以不用考虑了，除非处理之后有极大的变化，CQ值变小到30以内就0.5以内还可信，CQ变大了，最多1吧，放弃吧别考虑了

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问流式检测未经处理的肿瘤细胞的钙网格蛋白的水平，为什么本地就很高

府宅

推荐染色时添加FcR block，加去死细胞染料另外阴性对照用同型抗体

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问为什么HepG2细胞在96孔板中长不起来？

生如夏花zzh

在加孔之前要吹匀，细胞活力也很重要。把细胞加入96孔板之前需要吹匀，加的均匀一点

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问如果做污染物对肠分泌GLP-1的影响选择STC-1细胞还是NCI-H716细胞

bamboopiggy

你要有污染物的提取物，这两个细胞都可以，只是一个是人源的，一个是鼠源的，注意抗体的用法。

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问平板克隆几天后加药处理

府宅

当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,就可以终止培养，弃去上清液,用PBS处理。

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问THP-1悬浮细胞贴壁严重可能是什么原因引起的？

喵喵喵柏

如果没有加入PMA诱导的话，一般是不会贴的确认一下自己培养的细胞是thp-1吗？密度比较大的时候会抱团，但是不会贴壁而且培养的时候，瓶子要立着，不要平放

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