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科研学霸天团，48小时有问必答

问人多能干细胞培养基都需要什么成分

迟C迟

基础培养基为DMEM/F12培养基；添加剂包括碳酸氢钠400~600 μ g/ml、硒酸钠8~20ng/ml、重组人胰岛素生长因子10~30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80~120ng/ml、重组人乳铁蛋白7~13 μ g/ml、抗坏血酸50~70 μ g/ml以及重组人转化生长因子lng/ml~3ng/ml。

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问单外泌体蛋白组检测方法有哪些？

异乡人hyq

邻近编码技术（Proximity Barcoding Assay，PBA），为高通量、多因子的单外泌体检测开辟了新的途径。

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问复苏后的细胞经过运输后要怎么处理。

cxsm

先用酒精多喷外表面，充分消毒，擦干后再超净台中烧培养瓶的口，吸走培养基消化，转移到培养皿中

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问本人做的罗非鱼肾脏原代分离，组织块法，传了两三代之后，瓶壁上出现这种黑色的条纹，一片一片的，请问大家知道这是什么吗？

天一湖医者

有可能是黑胶虫，如果是，可以在镜下看到虫子运动，这样就没必要救了，直接扔。如果是细菌，也能看到运动，另外，培养基会明显变浑，这也没必要救，扔。如果是细胞碎片，那就换液，常规培养，细胞状态好了之后，自然消失。或者是瓶子本身不干净！

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问流式细胞仪测定细胞活性氧实验

天一湖医者

活性氧检测试剂盒（Reactive oxygen species assay kit）是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平

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问蜱虫组织切片一般切多厚？为什么把厚度降低后反而切不出完整的片？

未来9

切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以 0.2 ～ 0.3cm 为适

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问原代细胞种板以后发现中间部分不长或者长得不好，请问会是什么问题导致？

天一湖医者

估计你是洗的时候将细胞吹动了，有时候细胞贴得不是很牢，换液时一定要小心，轻轻将旧培养基吸出，不能吹打；加新培养基时也要注意，沿着孔璧缓缓加入，不要直接对着孔中央加进去。

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问检测某种细胞类型中的miRNA

天一湖医者

MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit 细胞/组织miRNA提取试剂盒

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问刚染毒的细胞有必要做细胞恶性程度鉴定吗

dxy_u3sb70e2

可以鉴定也可以每隔一段时间鉴定

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问抽提的质粒DNA电泳时怎么出现基因组DNA的污染？

bamboopiggy

加buffer2 裂解大肠杆菌的时候，操作轻柔，一定按照kit的说明书给的时间，及时加入buffer3，终止裂解。否则就会出现genomic DNA的污染。

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问为什么提出的质粒的多是二聚体和多聚体形式？

一个小哭包

这个与宿主细菌的种类有关系，网上可以查到。与电泳也有关系

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问加样时DNA飘出加样孔外？

bamboopiggy

你将DNA和loading buffer混合以后再往胶孔里面加啊，注意loadingbuffer的浓度。

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问B16细胞离心之后的细胞颜色

bamboopiggy

B16就是黑色素细胞瘤，在细胞多了以后，培养的上清都会变成黑色的，是细胞产生的黑色素增多所致，没问题。

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问细菌的透射电镜染色该怎么做呢？

bamboopiggy

染色之前，当然要固定，最好这个你找专门做切片的技术员帮你弄。

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问原代细胞过表达某基因能做稳转嘛

bamboopiggy

能活15代的话，做稳转没问题，稳转，一般筛2周差不多就筛出来了。

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问请教这个文献中唇颈环HE染色结果怎么看,是通过什么看出上皮组织组织损伤的呢？

bamboopiggy

因为好奇，我直接调出来原文看了一下： Black dashed lines with arrowheads outline the region of tissue damage in (P) and (Q) upon Srsf1 (P) and Srsf3 (Q) deletion, respectively. Dashed lines outline laCL---带箭头的黑色虚线分别勾勒出

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问请问用胰岛素体外刺激细胞之前都需要饥饿处理吗，为什么呢？感谢解惑

未来9

要的血清饥饿法培养主要有以下用途：(1)使细胞周期同步化。该方法可将细胞周期阻滞在G0/G1期，在此基础上进行的后继处理及细胞周期变化分析，结果更有说服力。这也是细胞饥饿法最主要和最常见的用途。在进行异种体细胞核移植重组胚胎前也要用该法使细胞处于休止的G0期。(2)无血清培养可使细胞处于饥饿状态，在加入药物后可更好的吸收药物，有助于药物作用的发挥。(3)血清可激活与细胞生长有关的信号通路（如MA

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问4T1细胞培养的观察

bamboopiggy

一般肿瘤细胞还是比较tough，比较好养的。你如果不确定形态，可以去atcc官网上看一下，或者维基百科也可以

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问细胞传代培养液中黑点问题？

dxy_gwrp7ndq

很可能是污染，如果污染的细胞数量不是很多，建议直接丢弃，或者重新复苏细胞进行培养。

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问MTT与CCK-8比较？

未来9

CCK-8法的优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；2、CCK-8法能快速检测；3、CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；4、CCK-8法的重复性优于MTT法；5、CCK-8法对细胞毒性小；6、CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。CCK-8法的缺点:1、与MTT法相比，CCK-8和XTT的价格比较贵。2、CCK-8试剂的颜色为淡

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