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科研学霸天团，48小时有问必答

问H9c2细胞培养昨天传代，今天发现有团块，还有一瓶有条黑线，这是污染了，还是有细胞团块呢？

bamboopiggy

黑线基本是掉进去的纤维，hepG2本来就容易聚团，你消化的时候，没有消化开

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问如何计算细胞培养密度

Keven轩

可以取一定量含有细胞的重悬液进行梯度稀释后上C6流式器进行计数

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问鸡骨骼肌原代卫星细胞提取及培养

Eason老歌迷

第二个问题:1做好人员的消毒工作，2操作时一定要保持无菌操作的原则，比如说使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生，比如说操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，每开一个试剂要用酒精灯消毒。3可以加入相应的抗生素。第三个问题:这个是要看你的个人经验，你多做几次就知道什么叫适度适量。这个没有一个可丁可卯的一个量化

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问成年鸡原代卫星细胞提取后，想确定细胞集中哪种才是卫星细胞

Eason老歌迷

是这样的，你标题有一个问题，然后你在内容里又问了另外两个问题，如果回答你下面两个问题审核就一直不通过。我就先回答一下你的标题的问题，如何区别鸡卫星细胞，卫星细胞又叫“被囊细胞”。了，它是神经胶质细胞的一种。神经节内包囊神经元胞体的一层扁平或立方形细胞。其细胞核为圆形或卵圆形，染色较深。细胞外面有一层基膜。包裹脑、脊神经节内假单极神经元的胞体及其盘曲的突起，在“T”形分支处与许旺氏细胞鞘相连续。在植

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问细胞没有及时换液，传代，出现的团块是不是细胞污染

Eason老歌迷

出现这种情况，你需要大概的判断一下，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查，用肉眼看一看，是不是混浊，培养基有没有颜色变化。还可以拿显微镜观察一下，在高倍镜下可以观察到细菌，它们可能是棒状或球状，单独成链或成团存在，它们也可能和细胞混在一起。有可能已经发生了细胞污染，也有可能是操作不当引起的。

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问RAW264.7细胞怎么避免过度分化？

浅陌NPKT

1.传代时密度稀一点20%-50%2.传代勤快一点，基本每天都传代，密度达到70%以上就要传了3.血清一定要好的，比如乌拉圭，Gibco的血清4.传代时，胰酶消化时间短一点，只要半贴壁的细胞，贴壁分化的细胞不要，操作轻柔一点，不要刺激到细胞

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问 细胞传两代后开始逐渐死亡的原因？

Guoood

传代不能过于频繁。建议等细胞长90%以上再进行传代，否则频繁消化细胞可能会损伤，可适当降低胰酶浓度，比如用灭菌PBS将胰酶稀释一半后使用。还有一种可能就是由于冻存细胞方式不对，复苏细胞质量比较差，不能很好的贴壁，可重新复苏一管好的细胞再试试！

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问细胞离心下来的离心速率应为多少?

Eason老歌迷

离心速率一般为300×g(约1000rpm)，以重力加速度g(980;s2)的倍数来表示单位。5 到10 分钟即可，转速过快，时间过长都将造成细胞死亡。

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问冻存细胞复苏解冻时间问题？

zeemee

37度水浴1-3分钟就可以，千万不要温度太高

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问细胞传代过程中的问题？

Eason老歌迷

第一个问题:也有可能是支原体污染，或者是培养基pH值过碱化，或者是你没有掌握好传代的时机，细胞老化了；还有就是可能接种细胞起始浓度太低了。第二个问题:首先你打错字了，你想表达的可能是抱团生长是吧。抱团生长有很多原因啊。细胞离心速度过大或时间太长。你消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开。你的细胞老化了。或者是你传代的时候没有吹打均匀，细胞团过多等等

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问对于难贴壁的心肌细胞，用多聚赖氨酸包被培养皿可以吗？我们一直用的是鼠尾胶原。

bamboopiggy

鼠尾胶原和多聚赖氨酸都可以，直接有促贴壁的作用就行。

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问如何预防细胞培养中黑点的产生?

Keven轩

使用质量较好的胎牛血清，并且加入细胞培养时向培养液中加入抗生素防止污染

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问一般拿到细胞后，应该注意什么?

Eason老歌迷

拿到细胞以后呢，就先不要开盖，放在培养箱里放一段时间，在显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞拍照，观察培养基的颜色，有没有漏液情况，细胞有没有污染。

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问THP-1细胞复苏困难如何解决？

Eason老歌迷

大概有几个原因，你可以看看是不是你的冻存液加太多了，或者是冻存的量太大了，或者是存在细胞污染，等等

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问请问这是细胞污染么？

Eason老歌迷

首先细胞污染主要是细菌污染，霉菌污染，支原体污染，黑胶虫污染，病毒污染，交叉污染等。一般啊细菌污染，它在显微镜高倍镜下多可见，根据其种类不同，有不同的外形，培养基呢会变浑浊、变黄较快，观察会很明显。你这个虽然没有明显的细胞污染，但是能看到一条黑粗线，是不是操作时误染上去的

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问什么是 MPF 对细胞周期调控？

Eason老歌迷

举几个例子，比如说对转录因子抑制物的磷酸化，对核纤层蛋白磷酸化，对H1组蛋白的磷酸化等。定义就是它通过使某些蛋白质磷酸化，从而改变其下游的蛋白质的结构和功能，来实现其调控细胞周期的目的。

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问贴壁细胞长满了不换瓶会怎样?

沙砾FLY

在动物细胞培养时，用培养瓶培养细胞就有贴壁生长，接触抑制的特点，如果细胞贴壁生长长满整个瓶身，以后细胞将不会再增殖，也不会出现长两层细胞的现象，这个时候就需要更换培养瓶和培养液，否则细胞将停止增殖。癌变的细胞就不会受到这一性质的限制。癌变的细胞贴壁生长长满瓶壁出现接触以后并不会出现抑制现象，还可以无限增殖。意思说，细胞可以长出两层，三层甚至更多层，无限增殖下去，最后就会出现一个肿瘤类的细胞团，一团

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问细胞复苏后的第二天需要换液吗？

dxy_non823e7

因为细胞冻存液中的DMSO对细胞有害，虽然复苏的时候去掉了上清液，但是多少还会有残留，所以比较建议细胞复苏起来的第二天换液。但是我也试过第二天不换液，细胞长得也可以。

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问细胞培养瓶中的细胞不贴壁是什么原因？

bamboopiggy

你这是什么细胞？感觉细胞是死了的，都圆了。

3 回答417 围观

问请问用一段时间的细胞，怎么检测细胞有没有感染其他组织？有什么试剂盒或者检测方法吗？

n0y0j7

感染其他组织？我觉得实验室同时有几种长的快的癌细胞，会不会某个瓶里两种细胞都有？会相互克制少的被灭了，还是形态各异很好区分能看出来，种属一样的话检测估计不好检测。

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