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原代成纤维细胞传代后 飘了好多 黑色团块 培养基清澈 但仔细看有流沙样
Eason老歌迷
感觉还是传代时消化过头,以至于细胞老化(胞浆出现明显黑色颗粒是细胞老化的标志),现在我采取的消化传代方法是:1,先用PBS细两遍,以去除残余血清对胰酶消化的影响2,加适量胰酶(以能铺满瓶底为宜),镜下观察见饱体回缩时即倒去胰酶3, 利用剩下的一点点胰酶再消化,此时可以放入37度温箱中4,隔半分钟到一分钟将细胞拿出,侧拍瓶壁(用力),镜下可见细胞基本都已掉下来,此时可以加含血清培养基中和,再用吸管吹
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问
细胞固体培养基和液体培养基是根据每种细胞类型来吗?
天一湖医者
是的,细胞固体培养基和液体培养基是根据每种细胞类型来的。
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问
细胞形状不一样是污染的原因吗?
天一湖医者
细胞形态不一,可能是污染,也可能是细胞老化等。
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问
碱性磷酸酶染色不上色是怎么回事呀
Eason老歌迷
你可以试一试偶氮偶联法。方法很简单: 固定,4%PFA 15min RT,1XPBS洗涤,后即可加染液,染液的配方: Fast red 25mg,a-磷酸萘酚钠 5mg,10%Mgcl2 0.3ml,4.5%Borax液 5ml,dH2O 44.6ml。然后室温孵育,镜下观察结果,待达到理想染色后即洗涤。
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问
请问大家24孔板爬片怎么能把细胞铺均匀呢?
hy-cell
用移液枪打匀后就轻轻放回培养箱静置,不要晃,开关培养箱也轻手轻脚
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问
求助:请问细胞中合成一个酪蛋白至少需要哪几种氨基酸?无血清高糖培养环境中细胞能够合成酪蛋白吗?
Eason老歌迷
你如果需要知道某种蛋白由哪些氨基酸组成,你可以去NCBI Protein数据库,我们一般称为NR数据库里查。无血清高糖培养环境中细胞能够合成酪蛋白。
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问
共聚焦拍摄荧光图片没有固定拍摄参数
balalaLy
没有固定参数这样拍出来的图片不可信
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问
p-smad2蛋白WB结果出问题求助
whilt-shirt
这种情况有可能是转膜没转好导致的
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问
重组蛋白可以用于大鼠蛋白过表达吗?
Eason老歌迷
可以的,重组蛋白可以用于大鼠蛋白过表达。重组蛋白和腺病毒转的区别就是,重组蛋白是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。
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问
求助PI3K/AKT/mTOR相关问题
Eason老歌迷
刚开始做最好不要太复杂。不可以只检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR。后续还有敲低,过表达双向验证,你这个思路是挺好的。
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问
细胞造模求助
misanisa
失败后来求讨论的....我按着其他人的论文上来做,也做不出来,用无血清的DMEM处理24h后再加IL-22的无血清DMEM,细胞都饿到瘦瘦瘪瘪。别说让它快速增殖了....希望大家教教我!
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问
流式平均荧光强度
Eason老歌迷
负数是做Logicle转换之后出现的正常现象,要出现,也是出现在阴性群。锁以,不知道你比较阴性群的目的是什么?但用负数来比较一个结果,是不太好看。所以,如果你要比较一个标记的表达强度差异,无论如何,即使阴性,也总得让它出现在较强的区域,将电压调高一点即可。更不用说很多标记,都会比对照要强,只要电压不要过低,都不会存在你所说的问题。
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问
要做细胞周期实验,老师说必须要有阳性对照组,但我查了很多文献都没有写阳性对照组
Eason老歌迷
需要的!这个高分sci都有阳性对照,一般阳性对照是用一种效果明确的手段来检测结果的有效性。
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PC-3前列腺癌细胞培养
Eason老歌迷
我觉得F12养的挺好的啊!推荐F12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%
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问
加入cck-8时,用的培养基可以用无血清的吗
balalaLy
标准做法就是用的无血清的培养基呀
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transwell问题求助
balalaLy
看着应该是染色没有染好,结晶紫染久一点
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问
高尔基染色
Eason老歌迷
高尔基染色的话,动物不能灌注,因为灌注会造成阴性结果。我们都是直接处死动物以后取脑组织,水洗一下,放入1、2混合液,24小时后换液,注意避光,室温放置14天。我觉得你说的这个沉淀其实对实验结果并没有太大影响。
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求助 冰冻切片老是碎怎么办?
Eason老歌迷
切片如果老是碎,切之前用手捂一下冰冻切片表面,可能是组织冻得时间太长,导致太硬。
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冰冻切片免疫荧光求助!杂信号特别多
Eason老歌迷
出现杂点有几个原因。1、二抗未洗净(再使用PBS多洗几次)2、孵育过程中出现了干燥现象,产生非特异性染色(注意湿盒的使用,避免干燥)3、抗原封闭不彻底(使用二抗同源血清进行封闭,延长封闭时间等)4、一抗特异性问题(换抗体,或者多抗换成单抗进行实验)。
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请教大神慢病毒转染小鼠BaF3细胞
Miracle星
要不你试一下用逆转录病毒和电转染
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