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科研学霸天团，48小时有问必答

问小鼠给药干预，每天多少？给药周期？

loveliufudan

对于给药量和给药周期，最好根据具体实验设计和文献资料来确定。通常情况下，药物剂量应根据体重和体表面积来计算。对于小鼠，通常使用mg/kg或mg/m2的剂量单位。对于给药周期，取决于实验的目的和具体方案。通常情况下，可以根据文献资料或相关实验室的经验来确定给药周期。一般来说，给药周期为1个月或2个月是比较常见的。至于如何解决每天给药需要称重的问题，可以使用组别平均体重来计算给药量，或者在给药初期进行

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问2型糖尿病大鼠的诱导

loveliufudan

SD大鼠在高脂喂养后体重在450g左右，早上测取随机血糖值在7.8-11.0 mmol/L范围内是正常的。血糖值的正常范围可能因为实验条件和大鼠品系的不同而有所差异，建议最好先查阅一下相应的文献或参考资料，以确保结果的准确性。同时，如果您需要更加精确的血糖测量结果，可以考虑在饲料中加入糖尿病试验饲料，或使用口服葡萄糖耐受试验等方法进行血糖测量。

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问求助结扎法小鼠牙周炎模型

loveliufudan

牙周炎模型可以采用多颗牙齿结扎的方式，但需要注意以下几点：结扎的牙齿数量不能过多，以免对小鼠的健康造成影响。一般来说，结扎一侧的两颗磨牙或者一颗门齿和一颗磨牙即可。结扎的牙齿位置应该一致，这样取组织时才能保证样本的一致性。建议在结扎前先测量牙齿周围的口腔菌群，以确保模型的稳定性和可重复性。如果担心牙周炎组织量不够，可以尝试使用其他方式构建模型，比如口腔注射牙周病原菌或高糖/高脂饮食诱导牙周炎等。对

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问小鼠肺组织

sswei

胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。胶原酶的使用浓度一般为0.1- 5mg/ml，消化过程中可以搅拌以促进酶的消化。胶原酶在消化的过程中可以引起细胞的少量死亡，一般消化时间为15min至数小时。如果浓度发生变化那么消化时间可能更长。消化过程中首选的缓冲液为含钙离子和BSA的Krebs Ringer Buffer。在消化的过程中如果细胞大量死亡则需要降低酶

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问小鼠睾丸HE染色

loveliufudan

这种结果通常是由于组织处理过程中的某些问题所致，例如过度固定、过度脱水、切片过厚或过薄等。建议您在处理组织时仔细操作，并遵循标准化的组织处理步骤。

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问大鼠游泳实验

loveliufudan

首先，大鼠尾巴烂掉和耳朵变黑的可能原因有很多，不能确定是哪个因素造成的，需要进一步排查。关于游泳至力竭模型，水温应该在25-30℃之间，一般来说越高大鼠疲劳越快，但是也不能过低，否则容易引起低温病变等问题。如果不进行负重，可以根据大鼠的游泳能力适当调整游泳时间，一般在10-15分钟左右为宜。至于器具的清洗和使用，应该保证充分清洗干净，最好不要使用之前放有强碱或有机试剂的容器，以避免残留物对大鼠造成

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问睾丸HE染色

loveliufudan

组织破碎可能是由于样品在脱水、清洗或包埋过程中受到机械性创伤或化学物质影响造成的。以下是一些可能的问题和建议：多聚甲醛固定时间过长：固定时间过长可能导致交联度增加，使得细胞和组织变得更加脆弱易碎。建议固定时间缩短到适当的时间。乙醇梯度脱水过快：脱水过程中，乙醇的逐渐浓度变化有利于渐进性地去除水分。但是脱水时间过短可能导致组织内水分过多，脱水时间过长可能导致组织变得脆弱。建议根据组织类型和大小适当调

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问求助！关于肠道菌群课题的样本量计算

土井挞克树

样本至少30个，有专门计算样本量的公式。

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问THP-1构造炎症模型

loveliufudan

THP-1是一种单核细胞白血球系的人类细胞系，通常用于构建体外的炎症模型。构建THP-1细胞的炎症模型通常需要刺激细胞以诱导炎症反应。其中，PMA是一种受体激活剂，能够激活THP-1细胞并促进细胞分化成具有巨噬细胞样特征的细胞。因此，加入PMA可使THP-1细胞的粘附性和吞噬能力增强，增加细胞对LPS等其他炎症刺激物的敏感性。当THP-1细胞处理PMA后，可使其表达CD14和Toll样受体（TLR

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问肠道厌氧菌复苏

sswei

控制好氧化还原电势低的条件是肠道厌氧菌复苏的关健。

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问求助：小鼠粪便混合菌培养，可以用PCR检测属水平目标菌丰度吗？引物怎么设计呢？

loveliufudan

针对你的目标菌属，你可以根据已知的序列信息，设计一对特异性引物进行PCR扩增，然后使用定量PCR技术来定量目标菌丰度。在设计引物时，可以使用专业的引物设计软件进行设计，如Primer3等。在选择引物时，需要考虑引物的特异性、长度、GC含量、互补性等因素，以确保引物能够特异性地扩增目标菌属的DNA序列。如果你在查阅文献时没有找到与你目标菌属完全一致的序列信息，你可以尝试设计一对degenerate

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问共聚焦皿里细胞成团块的原因

土井挞克树

再观察三天，有些细胞需要时间适应。

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问求助大鼠心力衰竭模型

龙大人驾到

大鼠给予异丙肾上腺素后发生死亡的可能原因有很多，以下是一些可能的因素：1. 给药方法不当：异丙肾上腺素的给药方法和剂量应该根据实验需要和动物体重进行调整。一般来说，异丙肾上腺素的给药可以通过静脉注射、皮下注射等方式进行。此外，给药前应该进行适当的麻醉和镇静，避免动物产生压力反应导致死亡。2. 异丙肾上腺素浓度过高：如果异丙肾上腺素的浓度过高，会导致血压升高、心跳加快等反应，严重时可能导致心律失常、

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问小鼠垫料

sswei

按一只笼子100g左右的比例放。

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问chamot的RANKL,100ng/ml,100×，TRAP染色后就这样，不知道有没有成功呀？

dxy_b0h9si93

检测一下染料配制时是不是溶解不充分

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问如何用长链脂肪酸给小鼠背部皮肤给药造模？用什么试剂？要用多少量？

sswei

步骤:操作前需先对鼠给药部位的皮肤进行脱毛处理，脱毛部位、面积视实验要求而定。一般选取脊柱两侧的躯干中间部分皮肤。脱毛时，可先将鼠给药部位的毛发剃短，再将脱毛药剂涂于其背部两侧 1〜2 min,之后用纱布蘸清水洗净擦干，或可用剃毛刀直接剃毛。脱毛 24 h 后观察脱毛部位有无破损、炎症、过敏等现象，若存在以上症状则不可给药。用綴子夹取酒精棉球于给药部位消毒。将鼠保定，使用棉签蘸取供试品涂抹在裸露

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问求助免疫细胞的免疫组化

sswei

蛋白质水平的多重免疫组织化学（mIHC）和多重免疫荧光（mIF）能分析、量化肿瘤中免疫细胞亚群、其功能状态及其在肿瘤微环境中的空间排列等，是目前检测肿瘤微环境免疫状态的核心技术。免疫组织化学（IHC）可以区分TME内表达相同蛋白质的不同细胞类型，并且可以描述其密度和空间分布。IHC还可以提供标记强度的定量评估。

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问为什么越是我的活性很好的越容易出现高剂量活性下降的趋势？？是类似免疫耐受吗？

sswei

底物浓度的影响是决定酶催化作用的主要因素。酶催化反应速度随底物浓度增加现增加在逐步趋向平衡再反而下降。酶浓度的影响：底物浓度足够高的条件下，酶催化反应速度与酶浓度成正比。温度的影响：适宜温度范围内，酶能进行催化反应，最适温度条件下，酶的催化反应速度达到最大。一般60°C以上易失活，5°C以下活性极低，Taq聚合酶95°C下仍稳定。

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问流式中单色实验，实验有俩抗体，阻断结果有跳点可能是什么原因导致的，请大神们指导哇

sswei

抗体质量低下，导致抗体特异性差，产生非特异性结合，发生跳点。

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问人PBMC中B细胞的流式分选

huarenqiang5

步骤如下：1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理。2、按血：分离液＝1：2注入淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟。3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次。4、获得细胞可做分选或其他实验。建议：1、实验中用肝素方法抗凝，效果不好，因为肝素抗凝后交接层混浊，洗涤后没有细胞。推荐使用ACD抗凝剂，效果very good

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