• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        请问使用流式细胞仪前 需要对样品做什么前期处理呢,比如说剪盖是什么操作 过滤等有什么操作技巧么

        相关实验:流式细胞仪标本制备

        user-title

        dxy_ucbt3299


        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        1.胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液

        2.1000r/min离心5min,收集沉淀。

        3.沉淀用PBS洗2次,1000r/min离心5min,收集沉淀。

        4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4℃过夜。即可送检。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程

        1胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液21000r/min离心5min,收集沉淀。

        3.沉淀用PBS洗2次,1000r/min离心5min,收集沉淀。

        4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4℃过夜。即可送检。


        备注:1每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散,避免细胞聚集)

        细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。

        2.样品可在-20℃保存一个月


        流式检测细胞 DNA 倍体样品处理流程

        1.胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液

        2.1000r/min离心5min,收集沉淀。

        3沉淀用PBS洗2次,加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参,内参与

        预检测细胞的比例为1:3

        4.1000r/min离心5min,收集沉淀。

        5细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4℃过夜。即可送检。

        备注:1每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散,避免细胞聚集)

        细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。

        2.样品可在-20℃保存一个月


        检测胞内蛋白上机前细胞处理流程

        1收集实验处理好的细胞,用PBS洗2次,2%多聚甲醛固定15min。2离心弃掉多聚甲醛,再用70%的冰乙醇固定过夜(4℃)。

        3离心弃掉乙醇,PBS洗一遍,加破膜剂0.5%TritonX-10050ul/106个细胞

        15min。

        4直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min,离心,用PBS洗一次,

        加荧光标记二抗(需进口二抗国内的效价比较低效果不好),总体系为100ul,总体系中应含0.25%(体积数)的TritonX-100,室温孵育30min。

        5也可以直接加FITC直标的一抗。

        6.离心,用PBS洗一次,用2%的多聚甲醛固定,4℃存放待测。

        user-title

        高山云初

        有帮助

        流式细胞仪上机前样品的准备

        样本的制备:

        1、细胞需悬浮于培养基或 PBS 中(含1%的血清或0.5%的 BSA );上机前需用200目筛网过滤细胞,为了避免细胞粘连,可以添加1mmol / LEDTA

        2、如果分选后的细胞用于继续培养,需确保样本无菌,可适量添加抗生素。

        3、推荐样品体积为200-500uL。用于分析的样品推荐浓度为0.5-5x10%cells/ mL ,用于分选的样本推荐浓度为106-107cells/ mL 。为提高分选的速率,可以先准备尽量浓的样本(大于107cells/ mL ),上机后根据分选效率再用培养基或缓冲液稀释成合适的浓度。

        分选需准备的材料:

        1、接收细胞的液体:完全培养基、血清、适合细胞存活的自制缓冲液、裂解液。

        2、接收的容器:1.5mL Eppendorf 管(至少加入100μ L 液体)、5ml BD Falcon 352054流式管(至少加入1mL液体)、15mL离心管(至少加入2 mL 液体)、96孔培养板(加入100uL培养基)、 PCR 管(板)(加入4-10uL预扩增液)。

        3、每次上机需要准备空白对照(未染色的样本)、同型对照和每一种荧光通道的单染样品来调节电压和补偿(在其他仪器上获取的电压值和补偿值不通用);为了圈门精确及验证实验,用户可以准备 FMO 对照和阳性对照。

        4、用户可以在分析(选)前把其他仪器上的流式图发给工作人员,为分析(选)做更充分的准备。

        5、使用96孔 PCR 板接收单细胞的用户需要携带未使用的96孔 PCR 板及透明的封板膜。

        user-title

        周末也要努力呀

        有帮助


        1. 剪盖:

        - 使用无菌剪刀或刀片,将细胞培养皿或培养瓶的盖子剪开。

        - 在剪切之前,确保工作区域和工具都是无菌的,以避免细菌或其他污染物的进入。

        - 剪切时要小心,避免将剪刀或刀片接触到培养物,以防止污染。


        2. 过滤:

        - 使用无菌滤纸或过滤器,将细胞悬液过滤到一个新的容器中。

        - 在过滤之前,确保过滤器是无菌的,并将其放置在无菌的过滤器架上。

        - 将细胞悬液倒入过滤器中,让液体通过滤纸或过滤器,以去除细胞团块和杂质。


        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序