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        ASC寡聚化求助

        相关实验:细胞穿透肽介导的肽核酸寡聚体传送实验

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        ASC蛋白怎么跑,不剪膜的话,二聚体和ASC蛋白怎么在一张膜上

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        3 个回答

        user-title

        沫子大大

        有帮助

        在不剪膜的情况下,ASC蛋白二聚体的分子量约为44 kDa,与常规的SDS-PAGE电泳分离条件下的分子量范围有所重叠。因此,建议使用较高浓度的聚丙烯酰胺和较长的电泳时间,以充分分离二聚体和单体的ASC蛋白。同时,建议使用Western blot方法进行检测,以提高检测灵敏度和特异性。

        user-title

        dxy_mqg1dtg8

        有帮助

        可以考虑使用独立的胶进行迁移,或者将二聚体和单体在膜上的位置区分开来,例如将二聚体和单体在膜上分别迁移到不同的区域,或者使用Western blot检测时,用不同的抗体对二聚体和单体进行检测。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        如果您想在同一张膜上检测二聚体和ASC蛋白,以下是一种常用的方法:

        1. 样品准备:将细胞或组织裂解,并提取总蛋白。根据需要,您可以预先处理样品以促使二聚体形成。

        2. SDS-PAGE准备:准备一张适合您所需蛋白分子量范围的聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE gel)。您可以使用预铸凝胶或自制凝胶。

        3. 样品加载:准备您的样品,添加适当的样品缓冲液并加入还原剂(例如DTT)。将样品加热至95°C,然后快速冷却至室温。

        4. SDS-PAGE电泳:将样品加载到凝胶孔中,并进行电泳。请确保您使用适当的电泳缓冲液,并根据蛋白的分子量和您的实验要求设置适当的电泳时间和电流。

        5. 转移到膜上:将分离的蛋白从凝胶转移到膜上,可以使用半湿式或干式转移系统。根据蛋白的大小和您的实验要求,选择合适的转移条件。

        6. 免疫印迹:进行免疫印迹实验,使用适当的抗体探测二聚体和ASC蛋白。您可以选择使用两个不同的一抗和二抗,标记不同的荧光染料或酶来检测这两个蛋白。

        7. 成像和分析:根据您所使用的检测方法,进行成像和蛋白定量分析。根据实验要求,您可以选择使用荧光成像系统或化学发光系统。


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