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        BMMY培养基诱导添加甲醇量的确定

        相关实验:毕赤酵母中的表达实验

        user-title

        dxy_wnlatt30

        在利用BMMY培养基甲醇诱导毕赤酵母表达时需要每隔一定时间添加0.5%甲醇,请问可以利用什么方法测定培养基中剩余甲醇浓度,确定需要添加的甲醇的量?

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        4 个回答

        user-title

        是TTT

        有帮助

        建议预实验可以用多个不同浓度的甲醇:0.5%、1%、1.5%等等去诱导,每隔24h添加甲醇至初始浓度。

        甲醇浓度测定有酶电极法,气相色谱法,亚硫酸品红比色法,所用仪器较昂贵,有条件可以使用。没有条件可以考虑醇氧化酶-过氧化氢酶联合酶促法。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        一般取培养基1ml然后测定培养基中的甲醇含量然后再添加

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可以使用高效液相色谱(HPLC)或气相色谱(GC)等方法测定培养基中剩余甲醇浓度。

        具体方法如下:

        HPLC法测定甲醇浓度:

        a. 取样品后进行处理,例如加入内标物、蛋白酶等;

        b. 使用反相高效液相色谱进行分离,使用梯度洗脱;

        c. 使用紫外检测器检测甲醇的浓度。

        GC法测定甲醇浓度:

        a. 取样品后进行处理,例如加入内标物、酯化处理等;

        b. 使用气相色谱进行分离,使用毛细管柱;

        c. 使用火焰离子检测器检测甲醇的浓度。

        在确定培养基中剩余甲醇浓度后,可以计算需要添加的甲醇量,以维持特定的浓度。通常可以使用线性回归法或标准曲线法进行计算。

        user-title

        sswei

        有帮助

        醇氧化酶-过氧化氢酶联合的酶促反应法或气相色谱法来测甲醇的浓度。

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