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        求助心肌细胞动作电位HEKA 程序

        相关实验:胚胎干细胞向心肌细胞的分化实验

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        dxy_ts81fbq5

        最近打算测量原代乳鼠心肌细胞动作电位,求助细胞内外液和patchmaster程序

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        2 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        实验前准备:打开总电源及稳压电源,打开电脑、放大器,并开启程序软件patchmaster,新建数据文档并准备开始试验;用P97微电极拉制仪拉制玻璃电极若干备用;检查减震台的减震效果,打开倒置显微镜,监视器和微操备用;取一皿细胞将其中玻片取出放入小培养皿中,置于倒置显微镜下,于低倍镜下寻找状态良好的细胞,并转入高倍镜下再次确认细胞状态及贴壁情况等;确认细胞后,取电极一根充灌电极内液,弹出气泡,然后套入银丝并插入探头中扭紧旋钮,用注射器管道给电极一点点正压,将电极入水;入水后,查案入水电阻,要在4-8M左右的电极才可以使用,通过调节微操,使电极不断向下接近细胞,待电极尖端逐渐变清晰并且将要接近细胞时停止向下,然后把电极移到细胞上方,调节放大器上的调零旋钮以保证基线在零水平。

          开始封接:调低微操步进速度,使电极尖端慢慢向细胞靠近,如发现基线方波突然变小,封接电阻上升时,即停止电极下降,通过注射器给电极负压,封接成功的可见方波很快变小,电阻升至G欧。此时,调节快电容补偿按钮,将快电容电流补偿掉,如封接稳定后,准备破膜。

          破膜:在钳制电位水平- 60mV时,漏电流<20pA,给予比较大的负压(也可根据情况使用ZAP电破方式破膜),将要破膜时可见基线上下浮动,破膜后,可见基线前后有两个较大的慢电容电流。此时需要观察操作程序上漏电流数值,如果超过50pA,表明漏电流很大,此细胞不能继续实验。如漏电流正常(小于20pA)则继续以下实验:调节慢电容(c-slow)与快电容(c-fast)补偿按钮,将慢电容电流也补偿掉。同时观察破膜电阻Rm(正常500M-1G)、串联电阻Ra(正常5M-15M),记录膜电容值。设置滤波频率为3.9KHz,采样频率为25-50KHz,要求漏电流小于20pA。

         

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        去膜片钳室做,patchmaster只是用来记录和分析动作电位的(如图);前期细胞液的制备按照protocol来弄

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