请教gallios流式细胞仪的使用

可以请教一下这种gallios流式的流程吗，就是目前用的程序做阴性对照和后面做单染设置补偿的时候总是有问题，每次跑的时候细胞都没有明显的分群，不管是单阳管还是混合染都主要在一个象限。

还有做前面对照的时候需要每一步都保存一个程序吗？比如说我做了阴性对照，然后调节增益把这个群放到左下象限，需要保存好这个时候的程序，然后做下一步的FITC单染时，用刚刚保存的这个程序来调节这个单阳管的位置使其它落在右下象限吗？然后保存再单染PI调节，最后保存好再用最终这个程序来跑双染的细胞吗？

还是说不用保存直接继续跑下一管，那不用保存的话刚刚设置的增益和补偿这些跑下一管时还是前面设置的吗？

问题感觉有点基础，但是被搞得都头秃了，辛苦老师帮忙解答一下，辛苦了辛苦了！！！