免疫荧光实验求助！

这里是我做出的一张免疫荧光图片，正常来讲下面左右两个椭圆形的区域是不会染上红色，而且背景颜色也会比较暗。原本以为是一抗的问题，但我做了一组不加一抗的染色，结果还是这样，其他步骤都是按照protocol做的，想请教一下大佬怎么解决这个问题呢？