细胞因子检测

特异性定量检测可溶性细胞因子或趋化因子一般釆用夹心 ELISA 技术, 细胞因子夹心 ELISA 的实验方法是用高纯度的抗细胞因子的抗体 (捕获抗体) 非共价吸附在塑料微孔板上。板子经过洗涤后，固定的抗体可特异性捕获样本中存在的可溶性细胞因子蛋白。洗涤未结合的物质，通过加酶标记的抗细胞因子抗体 (检测抗体) 来检测被捕获的细胞因子。最后加显色底物溶液，显色的程度通过 ELISA 酶标检测仪测定光密

ELISA 法检测的是可溶性细胞因子蛋白总量，而 ELISPOT 是检测分泌该蛋白的细胞的频率，是单细胞水平检测，比 ELISA 法更灵敏，能从 20 万-30 万细胞中检出 1 个分泌该蛋白的细胞。

微量样本多指标流式蛋白定量技术（cytometric bead array，CBA）是一个基于流式细胞检测系统的多元分析方法，它融合了芯片技术的理念，能够对单一样品进行多个指标的蛋白定量检测。

荧光定量 PCR 技术, 是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过 Ct 值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。

目前常用的细胞因子生物学测定法包括促进细胞增殖和增殖抑制法、细胞毒活性测定法、抗病毒活性测定法、集落形成法、趋化作用测定法及细胞因子诱导产物测定法等。这些方法比较耗时耗力，所以它主要用来评价细胞因子的功能和活性，而不是进行常规细胞因子检测的手段。

细胞内细胞因子检测法也称 ICK 法，这一方法阻断了胞内高尔基体介导的转运，使得细胞因子聚集、蓄积。FCM 在临床、科研中的广泛应用，与细胞内细胞因子（intracellular cytokine，ICK）染色技术相结合，可提供一种有效地在单细胞水平研究细胞因子的方法，这一方法可检测单个细胞内多个细胞因子，并可区分表达特定细胞因子的细胞亚群。本法测定的是细胞因子的前体分子，测定的对象是单一细胞。除

（1）细胞培养：将待检测的细胞接种在培养皿中，依据实验目的处理细胞，待收集细胞时，用 PBS 轻柔清洗 2~3 次以去除培养基对后续试验的干扰。（2）RNA 提取：使用 RNA 提取试剂盒，从细胞中提取总 RNA，并使用紫外分光光度计检测 RNA 浓度和纯度，A260/A280 在 1.8~2.1，表明 RNA 样品可用。RNA 很不稳定，易降解，建议测定完成后尽快进行反转录反应。（3）cDNA