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        求助:小鼠脾脏淋巴细胞的培养

        相关实验:小鼠脾脏树突状细胞分离纯化

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        蓝胖子SEHR

        有人培养过小鼠脾脏淋巴细胞吗,跪求大佬解答

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        3 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        小鼠的脾脏淋巴细胞是贴壁生长的,在胎牛血清中加入白介素培养基,或者直接把悬浮培养。

        具体可参考

        小鼠脾脏B淋巴细胞纯化培养方法的建立.

        这篇文章

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        这篇文献里的方法里讲的很清楚,关于小鼠脾脏淋巴细胞的培养“小鼠脾脏淋巴细胞体外培养前后细胞表面标记物CD3、CD4、CD44、CD62L 的变化”

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        方法:

        小鼠牌细胞体外培养,分组及免疫刺激:小鼠脱白处死,在体积分数75%的乙醇中浸泡1min,无菌操作取出脾脏制成单细胞悬液114,离心洗涤后培养于24孔板内,随机分成7组,依次为白细胞介素4组、CD3组、脂多糖组以及白细胞介素4+CD3组、白细胞介素4+脂多糖组、CD3+脂多糖组、对照组,每组3个复孔,细胞以6.0x10°L浓度悬浮于RMPI培养基中,分别加入白细胞介素4(20ug/L)、 CD3单克隆抗体(5mg/L)、脂多糖(100ug/L)及白细胞介素4+CD3 白细胞介素4+脂多糖、CD3+脂多糖刺激细胞,将未给予刺激的脾细胞作为对照组,置于37℃,体积分数5%CO2的培养箱中培养。培养期间,每隔一两天取细胞进行流式检测,并加入等体积的培养基和刺激因子继续培养。

        流式细胞仪检测淋巴细胞及其亚群:每组取相同体积的细胞,PBS洗涤,400g/min离心5min,弃上清,加入抗 CD19抗体(FITC标记)、抗CD3抗体(PE标记)、抗CD4抗体(PE-Cy5标记)和抗lgD抗体(APC标记),浓度均为10mg/L,混合均匀,4℃下避光30min,PBS洗涤2次后,弃上清细胞悬浮于100uLPBS中上机检测。送检样本次数5次。采用BDC6流式细胞仪获取数据,并用FlowJo软件分析流式细胞仪数据,结果利用平均荧光强度划分细胞群,再计算出各亚群细胞数量和百分比。

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