小鼠脾脏树突状细胞分离纯化

实验分类：

免疫学实验

别名：

dendritic cell，DC

最新修订时间：2022-02-10

简介

树突状细胞（dendritic cell，DC）是一种贴壁细胞，它在脾脏贴壁细胞中所占的比例小于 1％，细胞轮廓不规则，具有树枝状的突起。DC 不但存在于脾脏等外周淋巴器官中，也存在于外周血中。为了在体外研究 DC 的功能，需要对体内的 DC 细胞（主要是外周血、脾脏、淋巴结）进行分离、纯化。分离纯化 DC 的方法主要有两种：基于细胞物理性状的分离方法（如贴壁法）和基于细胞表面标记的分离方法（如 MACS 和 FACS 分离法）。

小鼠的脾脏 DC 是研究最多的淋巴组织 DC。脾脏 DC 的特征为组成性表达 MHC II 类分子和 CD11c。该群细胞可进一步分为三群：主要分布于边缘区的 CD4＊CD8-CD11b＋DC，主要分布于 T 细胞区的 CD4-CD8＊CD11bDC 和双阴性的 CD4-CD8CD11b＋DC，其中，CD8＋DC 表达 CD1d 和 DEC-205，根据需要可选择不同的方法将脾脏 DC 分选出来。

原理

贴壁法小鼠脾脏树突状细胞分离纯化的基本原理是小鼠脾脏 DC 在体外可黏附于玻璃或塑料表面，但培养 18～24 小时后，其黏附能力逐渐丧失，借此可与巨噬细胞分离。该方法无需特殊试剂，不需要进行密度梯度离心，操作简便、省时。但用此种方法获取的 DC 数量少、纯度低，而且分离所得的 DC 处于不同的分化阶段，无法满足精细实验的需要。

磁珠分选法小鼠脾脏树突状细胞分离纯化的基本原理是小鼠 DC 表面均表达 CD11c，因此，将包被了磁珠的 CD11c 抗体与小鼠淋巴组织或非淋巴组织细胞悬液共孵育并置于磁场后，结合了 CD11c 抗体的细胞将留在分选柱中，脱离磁场后可分离得到 CD11c 阳性的 DC。该方简单易行，若操作得当，细胞纯度可以达 95％以上。

来源：丁香实验团队

操作方法

小鼠脾脏树突状细胞贴壁法分离纯化

小鼠脾脏树突状细胞磁珠分选法分离纯化