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        切片出现非特异性染色可能原因?

        相关实验:免疫组化

        user-title

        paj12345

        免疫组化经过样本取材、固定、脱水包埋、切片、脱蜡、抗原修复、封闭、抗 体孵育、酶底物显色、复染、封片及拍照观察,发现有非特异性染色,可能原因有哪些?

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        3 个回答

        user-title

        balalaLy

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        抗体的特异性不高,或者一抗二抗以及封闭液选择的种属没有避开相同的种属,造成内源性IgG的干扰。

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        1如果检查过程中使用的抗体过期,或者抗体效价不够,均会导致非特异性染色。

        DAB染色时间太长或者变质,在进行DAB的孵育时间扩张会造成背景非特异性染色。

        存在内源性酶和生物素。

        如果一次性染太多片子的时候,容易出现组织变干,会导致非特异性染色。

        如果切片在缓冲液中修复液里面浸泡时间过长,会导致非特异性染色。

        抗体浓度过高。

        清洗不充分。针对这个问题清洗一定要充分,PBS液体一定要双蒸水新配,用之前再次测定pH值。

        如果选择了不正确的封闭血清,也会导致出现非特异性染色影响检查的结果

        user-title

        NatureBios

        有帮助
        1. 样本是否新鲜
        2. 抗原修复是否合适
        3. 一抗的特异性
        4. H2O2封闭
        5. ihc笔圈号疏水圈防止漏液
        6. 清洗充分
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