ROS流式细胞术结果变化不明显

（1） 处理过程绝对避光

（2） 染料与细胞混合时间要充分

（3） 探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高

（4） 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差

（5） 细胞应保持良好的活性状态。贴壁细胞培养时不应超过瓶底面积的75%，悬浮细胞培养时其数目不能超过5×1undefined5/mL；贴壁细胞在消化处理时要尽量温和、快速，避免产生过多的细胞碎片

（6） 使用流式细胞仪要确保侧面的细胞分散开（在与染料混合和处理时）

ROS本身会引起荧光染料降解从而影响实验结果，所以实验操作要标准。

该试验过程注意要点：（1） 处理过程绝对避光

（2） 染料与细胞混合时间要充分

（3） 探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高

（4） 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差

（5） 细胞应保持良好的活性状态。贴壁细胞培养时不应超过瓶底面积的75%，悬浮细胞培养时其数目不能超过5×1undefined5/mL；贴壁细胞在消化处理时要尽量温和、快速，避免产生过多的细胞碎片

（6） 使用流式细胞仪要确保侧面的细胞分散开（在与染料混合和处理时）

（7） 流式细胞仪对细胞数目有一定的要求，一般为1undefined6，可以使用六孔板

（8） 虽然一般要求将阴性对照组细胞调节电压至阴性置信区，但如果正常对照细胞DCFH染色较强、锋行太偏右，可适当降低电压，将锋行调节至中间，以便观察药物的抑制或促进作用。

（9）测荧光最好别用塑料管。