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        小鼠骨髓干细胞-全骨髓法,骨片法,求助!

        相关实验:小鼠骨髓造血干细胞及基质干细胞分离

        user-title

        C5O0

        全骨髓法P0满4天,严格按照差速贴壁法原则来换液,结果爬出来的都是间质样细胞,而且异质性高,也并未发现哪怕一个细胞克隆;

        最近用了骨片法,按照一篇nature protocol来做的,但是培基一加,骨片全脱落了下来,基本无法贴壁,在园子看见有朋友展示了细胞从骨片爬出的照片,所以想发帖问问大家,如何让骨片贴壁呢?

        以及胶原酶消化多久,骨密质要剪多碎?

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        2 个回答

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        首先你P0原代就出现问题,是不是考虑骨髓取材的部位?当然密度梯度离心法也可能导致细胞流失;现你换了贴壁分离的方法,依旧没看到,所以我还是倾向于骨髓组织取材制备的问题;最后那个传代建议使用胰酶浓度为0.05%进行消化。消化每t25培养瓶加胰酶1ml。消化时间约1-2min内,t25培养瓶培养液约7ml完全培养基。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        一般骨组织剪成约1~3mm3的碎片。

        消化酶可以选择1mg/mL Ⅱ型胶原酶于37℃摇床中振荡消化 。

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