小鼠骨髓造血干细胞及基质干细胞分离

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

干细胞（stem cells，SC）是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，可以分化成多种功能细胞。骨髓中含有造血干细胞（hematopoieticstem cells，HSC）和基质干细胞（stromal stem cells，SSC）。造血干细胞是指具有自我更新能力并能分化为各种血细胞前体细胞，最终生成各种血细胞成分，包括红细胞、白细胞和血小板的一类干细胞，它们在适当条件下也可以分化成其他细胞。骨髓基质干细胞具有成纤维样细胞外观、贴壁生长的培养特点，可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞等多种间充质细胞，所以又称其为骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）。小鼠骨髓造血干细胞及基质干细胞常常应用于干细胞的各个方面的研究，分离和培养小鼠骨髓造血干细胞及基质干细胞是开展相关研究的基础。

原理

造血干细胞约占小鼠骨髓细胞的 1／10，目前常用的分离技术是流式细胞术和免疫磁珠分选。有 12～14 种表面表型可用于分离纯化小鼠 HSC，目前还没有一个表面标记可以单独分出 HSC，常是多个表面标记共同使用。不同的实验需求使用的分选方案不同，分离纯化小鼠骨髓 HSC 最常用的标记是 LSK，但在该群体 HSC 仅占 20％，还有一些造血祖细胞。因此，很多方案是在 LSK 的基础上再加上其他标记，如 CD34 和 Flk2 标记通常与 LSK 联用分选 LT-HSC（CD34 Flk2 LSK），ST-HSC（CD34＊Flk2LSK）和 MPP(CD34+FlkundefinedLSK)。

流式细胞术分离小鼠骨髓造血干细胞的基本原理是将经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，用高压将其压入流动室内，流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷嘴喷出，在与细胞液流呈 90°方向上，激光束照射液流，使细胞产生散射光和荧光，通过光学系统检测并接收这些光学信号，同时将其转换成电脉冲信号，电脉冲信号经过计算机处理，得出每个细胞的多种信息参数。

基质干细胞的分离的基本原理是利用其贴壁的特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化的目的。

来源：丁香实验团队

操作方法

免疫磁珠分选分离小鼠骨髓造血干细胞

贴壁法分离基质干细胞