卵巢组织如何提取巨噬细胞?

将组织研磨成单细胞悬液，然后用CD68标记巨噬细胞M,φCD163标记M2，进行流式分选

组织用胶原酶消化成单细胞，染巨噬细胞Marker，进行流式分选

卵巢组织不太清楚，有一篇文章是从子宫内膜提取的，方法如下，你看看有用没，免疫组织化学染色：将获得的标本制成厚离EAMs。首先用含1%青链霉素的无菌PBS清洗异位的体积比例放置37℃水浴锅消化40～60min，每组织。在RPMI1640培养基中加入0.1%IV型胶原酶、0.02%透明质酸酶、0.004%DNA酶混匀，最终配联苯胺（DAB）染色1min，苏木素复染5s，盐酸乙过100目筛网过滤一次，滤去残余组织，得到单细灶，新鲜组织离体之后尽快（＜2h）分离培养。每例EMs异位病灶取长径为4～6cm，采用筛网过滤分醇分化，最后冲洗返蓝，脱水透明，封片。制成混合消化酶溶液。将组织与混合消化酶按1:3洗掉一抗，滴加酶标羊抗兔IgG聚合物，37℃孵育10min混匀颠倒，直至组织呈胶冻状。再将细胞经胞悬液，然后加入含10%胎牛血清的RPMI1640完全度2μm的切片，用酶标抗体法进行检测。首先在培养液终止消化。取一支适当的离心管，加入与单1.2.2原代EAMs的分离提取：EMs患者手术切除病酸钠修复、3%过氧化氢灭活内源酶，然后分别滴加细胞悬液等量的分离液。吸取过滤过的单细胞悬液室温下进行二甲苯脱蜡、梯度乙醇依次脱水、枸橼病灶3遍，去除血污，剪碎至直径＜1mm3的乳糜状CD68、CD163一抗（1:200）进行孵育，放入湿盒内4℃孵育过夜。第2天，37℃复温30min，用PBS40min，PBS冲洗3次，滴加适量新鲜配制的二氨基平铺于分离液液面上，过程始终保持两液面晰。室温，以500～900×g离心20～30min。离心后，液洗涤白膜层细胞，250×g，离心10min。最终用RPMI1640完全培养基重悬细胞，分离所得细胞置后每隔2d换液，每日用倒置显微镜直接观察细胞形态和细胞生长情况。待细胞生长铺满80%细胞皿释液层、乳白色淋巴细胞层、透明分离液层、红细可见离心管中由上至下细胞分四层。分别为：稀于37℃、5%CO2培养箱中培养。2～4h后换液，此胞层，用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞至另一洁净的离心管中，向离心管中加入细胞洗涤后，即可传代。

可以采用流式细胞术结合免疫方法提取。