WB条带曝光的时候，有一大部分阴影覆盖在条带上，是什么原因

原因：蛋白量太大，一抗浓度和时间太长

解决办法：根据情况调整蛋白量，同时一抗浓度和时间也可以缩短。

经验：这种情况很容易出现，因为很多原因都可能导致这一个结果。一般来说，蛋白量都是我们经过很多次摸索得出的最适蛋白量，因此不太可能是蛋白量过多引起的。最有可能的是因为一抗浓度太高，作用时间太长引起的。另外洗一抗和洗二抗千万不要偷工减漏，建议5miundefined5次，不要但是洗这么多次就把抗体和蛋白洗掉了，你又不是拿刀在上面刮，真正的抗原抗体的结合是通过这种方式洗不掉的。

1.一抗浓度过大 ，抗体如果很好用的话，增大稀释比例试试。

2.曝光时间过长，同样会由此现象。

但是这其中，上样量影响最大，建议楼主其他条件不动，减少上样量试试，可以减少一半。

1）上样量过大 这里指的是质量数过大，一般上样在20-100ug之间就可以，楼主可以减半上样量，试试看。

2）一抗孵育时间过长，适当缩短孵育时间，也可以改善。

可能封闭不够好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够

解决办法：降低一抗浓度，增加洗膜时间和次数。