组织切片脱蜡水化时使用的乙醇梯度设置几个比较好？时长控制在多长时间？是越长越好吗？

1)水洗后组织于5ml离心管内

2) 75%乙醇脱水1 h-2 h或过夜（此步骤可根据实验时间安排选择是否过夜)

3)80%乙醇脱水1 h-2 h

4)90%乙醇脱水1 h

5)95%乙醇脱水0.5 h或者过夜(此步可过夜组织仅限于肝，脑，肌肉等含水量多的组织)

6)无水乙醇脱水20 min两次(依据含水量多少，脱水20-60min)

7)无水乙醇+二甲苯1:1 20min。(进行过渡，以防脱水不彻底)

乙醇梯度（高至低：100%、95%、80%、70%）各2min，水洗5min（不要直接对着切片冲洗）

可以这样设置：50％酒精（1h)→70％酒精（1h或过夜）→80％酒精（1h）→95％酒精(0.5-1h)→95％酒精 (0.5h）→100%酒精(30min） →100%酒精（20min)。

1．在低浓度或纯酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

2．在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。无水乙醇吸水能力太强，容易造成组织块的过度硬化，使得切片理组织易碎裂。

3．如需过夜，应停留在70％酒精中。

一般设置6个梯度，控制在30分钟左右。不同的组织类型、不同组织类型、不同组织块大小所需的每阶段脱水时间不同，需根据自身需要进行简单摸索：若盲目脱水透明，脱水透明过头，会使组织脆性增加，切片时全为粉末状无法成形；脱水透明不够，会使组织与蜡块分离，无法获取平整组织切片