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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
请问鼠源的过表达载体可以转染进293T细胞吗?转染效率如何!
bamboopiggy
可以转293t,并且293t很好转,只要你动作轻柔,不要把细胞弄漂了
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问
两个一抗宿主都是rabbit,有没有办法共染,一个表达在核,一个在胞质,拍共聚焦
bamboopiggy
我在武汉塞维尔做过,同是rabbit,三染的,他们说可以洗掉再染。染的还不错。我估计就是加一个一抗,加一个二抗。再加一抗,再加不同色的二抗,这么做的,可能对片子制作的要求比较高。
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问
一抗没有明确标明可以做IF,但是可以做IHC,可以用来做IF吗?
未来9
没写或者说没做过IF相关实验的,应该问题不大
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问
做southern blot 时,在进行紫外交联仪固定时,参数应该调到多少J呢
天一湖医者
120000microjoules/cm2
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问
emsa实验试剂盒阳性对照没有带?
bamboopiggy
膜上的水没干,影响不大,但是你尼龙膜没有活化,影响很大,至少要TBE中活化10min。
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问
如何去除RNA提取过程中的蛋白质污染
dxy_gwrp7ndq
提组织的RNA有的时候蛋白的含量会很多,可以在加TRizol和氯仿抽提完第一次以后不加异丙醇,而直接加入TRizol氯仿再抽提一次,第二次抽提后会发现中间的蛋白明显减少的,如果感觉蛋白还是很多的话,再抽提一次也是可以的。
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问
如何利用血小板提取液检测血小板EP3受体
bamboopiggy
买ep3受体的抗体,直接western blot检测呗,如果少,就用elisa检测。
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问
请问一下P3出现阴性一般什么情况下会出现?
bamboopiggy
你说的是阳性对照出现阴性?那别的呢?如果都是阴性,可能是抗体不好使了,或者是浓度不够。
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问
western blot 内参
Y_沙琪玛
可能你用的内参是多抗而不是单抗的原因
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问
小白第一次做免疫组化,该选哪种做法最稳妥啊,两步还是三步法?
dxy_gwrp7ndq
二步法是灵敏度比较高的方法,操作较三步法便捷
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问
为什么marker分子跑不到15KD?
whilt-shirt
15KD的分子建议用12%的胶,10%的胶跑不了15Kd
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问
蛋白一直跑不出来,出来的位置也不太对
迟C迟
位置不对可能得原因有:1.胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度2.抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间3)酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物4)目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定5)标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量
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问
WB中目的条带拖尾并且出现非目的条带
bamboopiggy
目的条带拖尾是因为蛋白上样浓度太高了,当然也可能是蛋白降解了。出现非目的条带,感觉就是蛋白降解了。在处理蛋白过程中,要注意低温。
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问
骨髓瘤做完骨髓穿刺术后,免疫电泳是否要做?做下来的结果是什么?
未来9
做了骨穿就可以,不一定要做免疫电泳。免疫固定电泳阳性不一定是骨髓瘤。血清免疫固定电泳是确定多发性骨髓瘤免疫分型的一种检查手段,它不仅可以显示血清中存在单克隆球蛋白,即M蛋白,还能明确该M蛋白的免疫类型,即IgM、Ig G、IgA、IgD或Ig E一中的任何一种,是多发性骨髓瘤的诊断标准之一。
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问
快切酶的酶切时间和什么有关,快切酶可以过夜酶切吗?
府宅
一般内切酶的活性是: 1U = 1小时切1ug DNA. 一般大家都用过量, 10U左右. 时间上我一般是: < 1ug, 1小时; 2-5ug, 2小时. 基本适用所有情况.
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问
染色的标本的核周围有杂质?是什么地方有问题?
bamboopiggy
大概率是你的抗体坏了,看看需不需要重新配抗体,或者洗片子的时候,多洗一次。
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问
阴性对照组没有染色,但是组织切片和阳性对照却呈弱阳性?
Y_沙琪玛
1.阴性对照在洗片过程中被污染。2.染色体浓度太高。3.染色剂清洗不彻底。
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问
封片的时候建议用甘油-明胶还是树胶?或者树脂?
bamboopiggy
都可以,现在有那种固体封片剂,更好用,不会污染机器。
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问
最终染色不均匀是孵育温度有变化吗?还是别的问题?
bamboopiggy
是你抗体加的不均匀,温度也会有影响,但是抗体的原因比较大。
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问
0.3%H2O2-80%甲醇室温孵育这一步,是将两个试剂混合加入后孵育吗?
bamboopiggy
是,用甲醇配置H2O2,到0.3%,加入孵育。
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