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科研学霸天团，48小时有问必答

问磷酸化蛋白的 WB 检测怎么操作才能避免去磷酸化？

bamboopiggy

在lysis里加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂

4 回答672 围观

问DNA损伤指标（如gamma-h2ax）的foci如何快速准确的计数？

bamboopiggy

应该有图像处理的对应软件，如果没有，可以用ps里面那个点点的功能，最后会告诉你数值

3 回答1257 围观

问实验小白，拜大神给看下这个免疫沉淀反应到底出没出结果？双向琼扩实验是不是只能定性，不能定量？

dxy_gwrp7ndq

双向琼脂扩散试验常用于定性检测,也可用于半定量检测

3 回答673 围观

问细胞如何做多个抗体的免疫荧光染色？

bamboopiggy

可以同时染，如果二抗不一样的话，还可以把最明显的先染，最后染表达量低的

3 回答1874 围观

问用组织做免疫荧光，最后荧光拍照时组织上那些斑斑点点的非特异性染色怎么去除？

bamboopiggy

都封片了，没法去除了，下次做的时候，降低一下抗体浓度，或增加洗涤次数试试

3 回答1065 围观

问同一个抗体在不同组织中出现条带不同的原因？

天一湖医者

关键在于成像的过程。同一张膜，可以在成像的时候，做出完全不同的图片结果。显色液的滴加，量，以及曝光时间，条带颜色（要求灰色而不是黑色）。所以最好有图片说明问题。

3 回答274 围观

问跑电泳时，结果不清晰咋办

府宅

原因有很多。第一，蛋白上样量可能太少了；第二，上样蛋白太杂了，没有纯净的条带；第三，上样蛋白含盐量或其他离子量太高；第四，配置的胶浓度不合适；第五，样品蛋白经过上样处理液处理的不够充分；第六，胶脱色后浸泡过久等等，还是要结合你自己试验的过程来分析才行

4 回答2007 围观

问蛋白转移不到膜上，但胶上有，同时Marker 转上去了，为什么？

bamboopiggy

可能你的转膜时间不够，试着延长一下转膜时间。

3 回答712 围观

问WB目标带是空白，周围有背景

bamboopiggy

因为你蛋白浓度太高了，把发光试剂很快消耗光了，来不及拍照，可以试试降低蛋白浓度。

3 回答232 围观

问WB胶片背景很脏，有什么解决方法？

bamboopiggy

可以试试把tween的浓度改为千分之一点五

2 回答468 围观

问免疫荧光怎么看共定位呢，merge之后有跟DAPI交叠的，也有没有与DAPI交叠的，那这个目的蛋白是表达在哪里呢？

xuchanglu88

其实你看到的文献中大部分是在表明这个蛋白是表达在细胞核，但是具体到表达在细胞核的哪个部位，那则需要更高维度和分辨率的方法去回答。在很多时候，你能够看到你的目的蛋白merge之后与DAPI的交叠就在一定程度上说明目的蛋白表达在细胞核，但要是再探究是核里的哪个位置，那就需要更高分辨率的技术手段了。

2 回答5571 围观

问有没有大神做神经元内质网应激通路的呀？求抗体推荐🙏 🙏 🙏 🙏

bamboopiggy

去cst官网看看，有专门的ER stress antibody的kit卖，里面有内质网应激的特异性抗体

1 回答180 围观

问怎样查找miRNA与蛋白的结合位点

xuchanglu88

这个可以通过生物信息学方法和实验方法，对于生物信息学方法，可以选择TargetScan和miRnada；而实验方法则可以通过免疫沉淀、干扰你的miRNA后检测基因的表达变化等。个人建议先进行上面提到的或者你自己查到的一些软件进行预测，然后再结合实验手段进行验证。

4 回答1047 围观

问免疫荧光一抗没在摇床上过夜，就只在四度静置过夜会染不上吗？

dxy_gwrp7ndq

不保证能均匀敷上，效果会不好。

3 回答3722 围观

问碧云天核蛋白提取试剂盒提取后为什么跑wbnrf2蛋白无条单laminb也没有？

bamboopiggy

1.你跑whol lysit的对照了么？对照有条带吗？2.这俩抗体你以前用过吗？切的位置对不？二抗有没有用错？现在提核的技术很稳定,碧云天的盒子应该可以用，不行的话，你买个thermo的盒子试试。那个我用过，没问题的

3 回答510 围观

问抗体纯化的方法怎么选择

府宅

固定化金属螯合亲和层析法：配体稳定性高，吸附量大，洗脱条件温和，但同样也更加复杂，因为需要额外的步骤固定金属离子。离子交换层析法：离子交换层析是一种较为常见并被广泛使用的抗体纯化方法。尺寸排阻色谱法：可用于DNA，蛋白质的纯化，缓冲液更改，脱盐等。疏水作用层析法：与蛋白质的作用比较温和，所以能够更好地保持生物大分子的天然结构和生物活性，同时疏水作用也非常擅长从大体积样品中提取低含量的目标蛋白。

3 回答621 围观

问WB实验抽提蛋白是用的loading buffer浓度？

whilt-shirt

一般情况都是用5x的，毕竟加到蛋白裂解液里面会稀释loding

5 回答3955 围观

问我的wb内参条带两边是翘起来的，请问怎么回事呢？

天一湖医者

电泳条带或整体出现 “︶ ”形状，可能原因主要包括两方面。一是电泳速度过快，可通过减少电压等减慢电泳速度。二是电泳温度过高，使得胶变形，可在冷室或者冰浴中进行电泳或者改变电泳pH。

5 回答2847 围观

问什么情况下蛋白需要进行超声

未来9

看你的样品种类，细胞或细菌需要超声处理裂解蛋白

4 回答1053 围观

问脾单个核淋巴细胞培养及进一步活性分析与分离单个核细胞后直接进行活性分析实验准备和方法有什么不同？

bamboopiggy

进行活性分析，是用流式吧？处理后，直接进行流式就可以。没有什么区别。

1 回答257 围观

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