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问
在显影液中显影1分钟和5分钟后,底片漆黑一片,是什么原因呢
balalaLy
要么是胶片本身曝光了,要么是压胶片的时间长了,建议可以同时压4-5张胶片,时间1分钟以内
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问
求助:免疫组化染色全是一片红色?
府宅
组织变干一下子染太多片子的时候,容易出现这种情况。解决的办法就是不要贪多嚼不烂。一次少染几张。还有就是试剂充分覆盖组织,超出组织边缘2 mm。然后用PAP笔在组织周围画一个圈圈,把修复液圈在里面。避免修复液流走。圈圈应该距离组织边缘3-4 mm。 浸泡时间过长切片在缓冲液或修复液里面浸泡过一夜,也会引起杯具。这都是偷懒的做法。但是有时候也是可以偷一下懒的。独门秘技就是4°C冰箱。只要把容器放在4°
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问
细胞是100%阳性却出现分群
此用户已注销
培养的细胞出现污染、细胞自身表达荧光蛋白基因、药物处理后都可能出现某通道上有阳性表达。
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问
如果流式细胞术检测到细胞是CD38+,但是CD138-,如何判断是否是浆细胞来源呢
Eason老歌迷
可以参看这篇文献”流式细胞术检测CD38、CD138在急性白血病、浆细胞骨髓瘤表型分析中的意义”,讲的很详细。
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问
免疫荧光: 冲洗时,用PBS和PBST效果会有差别吗?用PBST背景色会明显降低?)
冷泉港蛋白
一、会有差别,PBST会好些。二、原因在哪里?1.看下PBST比PBS多T,T是一般是TWeen 20.2.结构决定功能:TWeen 20是两性表面活性剂,一头疏水,一头亲水,因此它可以洗脱掉由疏水相互作用所产生的非特异性吸附,一定程度上降低假阳性。3.常用浓度:TWeen 20通常使用的浓度是0.1%,这与它的CMC有一定关系
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问
免疫荧光加完一抗之后,需要室温孵育一会吗?还是直接4℃过夜就可以了?
whilt-shirt
直接4℃过夜就行,这样效果会好一点
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问
流式细胞术检测胞内因子
Eason老歌迷
可以参考这篇文献”检测靶向治疗后急性T淋巴细胞白血病的试剂组合物及其应用的制作方法”,讲的很详细。
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问
应激颗粒免疫染色特异性低
Eason老歌迷
特异性弱,可能有几个原因。一个是标本固定、包埋不当。固定剂不佳、固定时间过长、浸蜡包埋温度过高,会导致抗原完全破坏,这些都是常见原因。由于不同的抗原对环境耐受性不同,有些标本虽然能做出一些较好的指标,但不稳定和含量低的抗原可能已消失殆尽。二是抗原修复问题。由于免疫组化技术的发展,现在能在石蜡切片中显示的指标很广。相应地,除了优质的抗体外,我们也越来越依靠各种暴露或称修复抗原的方法,包括酶消化、热修
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问
细胞免疫荧光图定量统计
Eason老歌迷
细胞免疫荧光或组织切片进行免疫荧光后,一个组织拍摄3-5个视野。统计时用的软件是可以用imagej 也可以用ipp6。
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问
磁珠分选时,为什么不能用含钙镁离子的缓冲液
bamboopiggy
因为磁珠分选的buffer里面含有edta,如果用了含钙镁离子的缓冲液,会中和掉edta
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问
请问流式检测膜蛋白表达的变化用多克隆抗体出结果的机会大吗?
此用户已注销
抗体只是针对相应抗原的,⾄于是针对胞内还是胞膜对你检测来说并⽆明显影响,你只需要查清楚到底是针对哪⼀个部位的抗原的,应该是可以⽤同⼀种抗体进⾏检测的,在流式操作时只需注意:如果是针对胞内,则需要加破膜剂,让抗体能和相应抗原接触,否则就不需要了。
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问
小鼠外周血进行流式细胞术鉴定细胞分型,为什么线性图看不到分群但是对数图可以?
此用户已注销
细胞分不开的因素有个人认为有以下因素(1)抗体的特异性不好(2)选的单标不合适,若细胞本身抗原就低表达,若还选择弱荧光的FITC那估计确实难以分开(3)前处理有问题,这点我自己感触很深,因为我刚做流式的时候单标抗体也分不开,后来经过好几次摸索才将细胞分开的,细胞一样,抗体也一样,就是前处理不一样。(4)仪器参数的设置,这个一般操作人员的技术比较高应该不会有多大问题,不过我们一般做的时候都会加一个同
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问
PSA-NCAM,A2B5磁珠分别分选的什么细胞
冷泉港蛋白
1.说下PSA-NCAM:分离PSA-NCAM的阳性细胞,即细胞膜有该分子的细胞,比如Neural cells,厂家的阳性对照做的是该细胞厂家说明书(下图),你可以查下:2.如何查询这些信息:A.登陆数据库 UNIPROT 输入 目的蛋白,找到expression.B.查询提供分离磁珠的厂家,说明书会有C.查文献
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问
流式分选仪补偿怎么调整
此用户已注销
现在流式细胞仪都是自动调节荧光补偿,不过也要做好准备工作。如当我们同时检测四种荧光素FITC、PE、Per CP、APC,做补偿调节,需要以下的样本,无任何染色的样本,FITC, PE, Per CP以及APC单染阳性的样本,这里需要一共5个管子。 在纯手工的年代,你需要画出这四个颜色两两配对的散点图,比如FITC-PE, FITC-Per CP, FITC-APC, PE-Per CP,PE-
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问
请问从人源PBMC中分选的T细胞亚群是需要现用现取吗?可否冻存或是否有稳定的细胞系呢?
此用户已注销
先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物,然后用CD4+T细胞的单抗,免疫磁珠法分离;或者利用流式细胞仪进行分选。如果精确的话得用专门仪器了,要后续培养干扰小建议磁珠分,这个操作比较简单,对设备要求不高,如果是要纯度高推荐流式细胞术了,这个需要有分选的仪器,一般分析仪器只能分析比例。
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问
请问多色免疫荧光这个技术如何?能够单独作为一篇文章的新技术亮点吗?
你好几和户
是亮点但也是难点,组织多色免疫荧光(mIHC),其染色分辨率更高,荧光信号强度更强、更稳定,并且不受抗体种属的限制,还是比较推荐的。
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问
有的抗体在做IF时,效价很低,做wb时效价很高,说明书写明可以做IF和wb,种属也没问题,出现的原因?
whilt-shirt
这是抗体的原因,建议更换抗体试试
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问
PE抗体无法标记,而FITC抗体的结果却很好,是什么原因?
bamboopiggy
说明是PE抗体有问题了,建议换抗体。
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问
免疫组织化学的对照怎么设置
此用户已注销
做相关抗体预测实验,弄清楚抗体浓度,最好同时做抗体阳性和阴性对照
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问
coip怎么区分抗体轻重链?
此用户已注销
在IP实验过程中,很容易产生IgG重链轻链的干扰,严重影响对结果的判断。那么,要想知道怎么样减少这些干扰呢,首先要理解这些干扰是怎么产生的。最好选择两个不同种源的抗体。选择同一种源的抗体的问题在于:在WB之前进行的蛋白变性这一步,由于加样缓冲液中含有巯基乙醇,巯基乙醇会把抗体的重链和轻链之间的二硫键破坏,从而使的抗体变成重链分子55KD和轻链分子25KD。假设你IP的抗体是兔抗的,目的蛋白进行WB
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