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问
求助 中性粒细胞分离
纵横捭阖DTOU
覆盖在分离液上的时候有没有分层存在,如果有的话考虑可能是小鼠全血太少了,覆盖的时候太快,缓冲进入下层的也会影响结果,就是一定要缓慢,看你的图分层不够干净,有红细胞混杂在上层。
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问
LPS 脂多糖配置、保存
锦鲤正在进行时
取10mgLPS加20微升DMSO,加PBS至10ml即得1mg/ml,4℃一月,-20℃储存的久一些,除菌的话可以用0.22微米的滤头
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问
细胞代数靠后会影响实验结果吗
我们会有以后的
时间推移慢慢的,细胞代性和细胞生物学特性都会有影响。
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问
免疫荧光,一次能做到几色?会相互干扰吗?
土井挞克树
可同时做到五个通道,他们不是相互干扰是发射光谱会重叠
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问
流式会因为抗体与膜非特异性吸附,造成阳性率升高吗
土井挞克树
会的,非特异性结合会影响实验结果的。
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问
如何改善D-Dimer胶体金产品低浓度显色梯度?
大草原的小灰驴
严格按照说明书上的步骤操作,在其规定的时间内判定结果。反应时间延长也会导致假阳性出现。
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问
ELispot 问题分析
土井挞克树
大概率是非特异性结合,一般来说特异性结合的斑点大,非特异性结合斑点小。
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问
抗体1、2ul,应该用什么方法纯化
Eason老歌迷
可以试一试Protein A和protein G纯化法。基本原理就是protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A和protein G 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上,当抗血清从中流过时,特异性的IgG就与配基结合,其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同,我们需要具体情况具体对待,分别选择protein A
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问
【求助】M2型巨噬细胞鉴定
此用户已注销
我也是在做巨噬细胞,不过是做的免疫荧光染色。我看到的文献,大多数是做荧光双染,F4/80+CD206,或者CD68+CD206。也看到过一篇6分左右材料的文献,是组化单染CD206或者CD163,代表M2巨噬细胞
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问
新手小白,求助流式实验中的问题?
lyang556
APC英文全名:allophycocyanin;中文名:别藻青蛋白;最大吸收峰:650nm,最大发射荧光峰:660nm,适用于双激光流式仪,可被600-640nm波长的激光激发。
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问
流式细胞术中出现非特异性染色除了自发荧光之外,还有哪些原因?怎么避免?
elabscience
除此之外,巨噬细胞、单核细胞等表面表达大量的FCR,会与抗体非特异性的结合,因此在对此类含有大量FCR的细胞进行抗体标记前需要先进行封闭。
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问
流式细胞术中遇到的问题?
土井挞克树
抗体连没连荧光素,没连荧光素标签就连不上
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问
请问这是什么原因呢?尼式染色一直都做不好
天一湖医者
有可能是你用的染液过期了。所以出现这种情况。
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问
IgM抗体纯化
此用户已注销
大多数IgM类抗体是优球蛋白不溶于水,故可用双蒸水透析纯化IgM。对那些溶于水的IgM类抗体可用饱和硫酸铵沉淀。沉淀后可以采用颗粒排斥层析法(凝胶过滤)进一步纯化。颗粒排斥层析(size-exclusion chromatography)法又称分子筛层析或凝胶过滤,是利用微孔凝胶分离不同大小分子的抗体,可用于样品中IgG和IgM的分离,常用于对硫酸铵粗提物的进一步纯化。通过该法纯化所得抗体可
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问
切片出现非特异性染色可能原因?
balalaLy
抗体的特异性不高,或者一抗二抗以及封闭液选择的种属没有避开相同的种属,造成内源性IgG的干扰。
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问
免疫组化实验中细胞、组织的形态被破坏的原因有哪些?
balalaLy
固定不及时、脱水的过程、切片、贴片不熟练,切片刀不够锋利或有豁口。染色过程中动作粗暴,干片都会对形态造成影响
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问
、流式细胞检测中怎样把对照和样本的检测结果放在⼀张图中?
elabscience
上机时是不可以放在一张图中的,后期分析的时候很多流式软件都可以将多个结果叠加在一起。
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问
标本必须在抗体染⾊后30分内检测吗?
elabscience
标记完成后尽快检测,放置时间过长既可能导致荧光淬灭,也对细胞状态有影响,某些指标的表达量也会变化,导致结果不准确。
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问
FCM检测表达结果到底是⽤百分⽐还是MFI?
土井挞克树
个人认为如果有明显阴性细胞群和阳性细胞群,应计算百分比;无明显分群,仅荧光强度发生变化的应该用MFI。如果是整体峰移(或者叫单峰),那么根本不存在MFI之外的任何合理的指标,不管MFI跟其它指标吻合度如何,这就是客观数据、客观事实。
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问
FL1, FL2, FL3 的区别是什么? 是指在不同位置测得的荧光?还是不同波长的荧光?这3个参数到底测的是什么
elabscience
FL1, FL2, FL3是流式的三个通道,对应3中不同波长的滤光片,用以接受不同的荧光信号,具体每个通道检测的波长范围需根据仪器配置来确定。
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