实验问答22,787,818 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问小鼠大脑切片的免疫化学实验

sswei

包括阳性对照在内，全部呈阴性反应，原因可能是：①染色未严格按操作步骤进行；②漏加一种抗体，或抗体失效；③缓冲液内含叠氮化钠，抑制了酶的活性；④底物中所加H2O2量少或失效；⑤复染或脱水剂使用不当。

4 回答436 围观

问co-ip时出现的IgG重链条带怎么解决

土井挞克树

换另外一种二抗的IgG，是非特异性结合

4 回答1894 围观

问southern blot 检测HBV的DNA变化，RcDNA和nsDNA的条带怎么分析？是看rc还是ns？

土井挞克树

如果看的是dna变化的话，一般是看rc。

2 回答423 围观

问做免疫荧光经验求分享？

土井挞克树

如果核定位不好,建议封闭和打孔合为一步,即在封闭液中添加0.5% TRITON-100,37度封闭2小时,加一抗后最好4度孵育过夜(16小时)。

4 回答522 围观

问免疫电泳实验中，电泳条件已经优化，但仍然无法分辨出目标蛋白。我该如何提高分辨率和灵敏度？

土井挞克树

可以在电泳之前应用免疫沉淀法将抗原进行纯化

2 回答352 围观

问病毒中和实验中，如何确定最佳的病毒和细胞比例以获得最高的病毒中和效果？

龙大人驾到

1. 初始的病毒和细胞比例可以根据文献或前人经验进行初步选择。2. 进行一系列病毒和细胞比例的实验，产生一组数据，以评估不同比例下的中和效果，并确定最佳比例。3. 可以通过稀释病毒溶液来获得不同的病毒浓度。例如，对于包含106个病毒的溶液，可以通过将其与相应量的培养基混合并逐步稀释到10-6的浓度。4. 对于每种稀释物，与一定数量的细胞进行接种。接种后，可以根据实验需要和方法使用不同的检测方法（例

3 回答645 围观

问免疫荧光实验中，如何选择最佳的探针以获得最高的灵敏度和特异性？

huarenqiang5

荧光探针的选择主要从以下几个方面考虑。（1）仪器所采用激光器的类型：应根据仪器采用激光器的类型进行探针选择。如共聚焦激光扫描显微镜采用氪/氩离子激光器，激发波长为488nm，568nm，647nm，可激发多种荧光探针。（2）荧光探针的光稳定性和光漂白性：在进行荧光定量和动态荧光监测时，要求荧光探针有较高的光稳定性，也可通过减少激光扫描次数或降低激光强度的方法，来减轻光漂白的程度。但在进行膜流动性或

1 回答796 围观

问求助！求一个RAW264.7巨噬细胞极化CD86和CD206流式protocol

loveliufudan

以下是CD86和CD206流式细胞分析的基本流程和protocol：CD86和CD206的流式细胞分析基本流程：1.制备单细胞悬液2.细胞表面标记抗体染色3.流式细胞分析仪分析CD86的流式细胞分析protocol：1.用PBS洗涤细胞，离心收集；2.用离心管离心收集细胞，弃去上清液，细胞用0.5mLPBS重悬；3.加入0.5μL CD86-FITC标记抗体，室温孵育30min；4.再次用PBS洗

4 回答12756 围观

问LD和MS分选柱怎么重复利用呢

huarenqiang5

每次分选完用buffer反复冲洗柱子几遍后用无水乙醇冲洗几遍，再放入有无水乙醇容器里完全浸泡(一定要无水，不然就会生锈)，等做完实验再拿出来把柱中的无水乙醇打出，放置到一个小铁饭盒里拿去高压灭菌，在放到干燥箱里干燥就可以了，下次用的时候再拿到超净台里打开铁饭盒，用无菌镊子取出继续利用。

3 回答448 围观

问T细胞增殖是否成团

huarenqiang5

一般正常情况大概20%左右细胞成团，一直会持续到14-16天左右才散开。一定程度影响细胞增殖倍数。

3 回答750 围观

问thp-1诱导后的巨噬细胞有什么作用？ M0,M1,M2有什么区别？求各位大佬解答

sswei

作用：①作为抗原提呈细胞；②杀伤肿瘤效应细胞；③巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的机制；④活化的巨噬细胞与肿瘤细胞结合后，通过释放溶解细胞酶直接杀伤肿瘤细胞；⑤处理和呈递肿瘤抗原，激活T细胞以产生特异性抗肿[医学教育网原创]瘤细胞免疫应答；⑥巨噬细胞表面上有FC受体，可通过特异性抗体介导ADCC效应杀伤肿瘤细胞；⑦活化的巨噬细胞可分泌肿瘤坏死因子（TNF）等细胞毒性因子和产生超氧化代谢产物间接杀伤肿瘤细胞。巨

4 回答18579 围观

问免疫实验中的控制实验是什么，它们为什么很重要？例如，如何利用阴性和阳性对照来确定实验结果的可靠性？

土井挞克树

阳性对照实验和阴性对照试验是生物学实验中常用的两种对照方法。其中阳性对照实验是对对照组施以能发生阳性反应的处理，其目的是显示阳性反应结果;而阴性对照实验是对对照组施以发生阴性反应的处理，目的是排除假阳性反应的干扰。阴性对照实验与空白对照试验并不完全相同，阳性对照实验和阴性对照试验是针对“预期结果”而言，其预期结果分别为阳性反应与阴性反应，其中阴性对照实验可采用安慰剂处理，也可采用空白对照处理。而空

3 回答281 围观

问氯霉素培养基要怎么配？浓度是34mg/ml 配1L一次就没了？（是不是）工作浓度∶严密型质粒25微克每毫升松弛型质粒170微克

龙大人驾到

配制氯霉素培养基的步骤如下：称取34克培养基粉末加入到1升去离子水中，充分溶解。加入氯霉素盐酸盐，将其溶解至所需浓度。根据您提供的信息，严密型质粒工作浓度为25微克/毫升，松弛型质粒工作浓度为170微克/毫升。因此，如果您要配制1升氯霉素培养基，需要加入25毫克严密型质粒和170毫克松弛型质粒的氯霉素盐酸盐。用去离子水调整溶液体积至1升，充分混合。

3 回答8280 围观

问细胞免疫实验测定蛋白质定位

sswei

有3种方法可以测定蛋白质定位：1、免疫结合法2、同位素跟踪法3、探针法

4 回答698 围观

问coIP/抗原抗体过夜有沉淀/非特异

loveliufudan

您可以尝试以下几个方法：优化裂解液成分和pH值减少孵育时间和温度在加入磁珠前离心取上清，并且在加入磁珠后再次离心去除残留絮状物

3 回答549 围观

问转录组分析

loveliufudan

如果你想要获取上调前20%的基因，你可以根据Log2FoldChange从大到小进行排序，然后取前20%的基因。例如：共有100个上调基因，对这些基因根据Log2FoldChange从大到小进行排序，然后取前20个基因。但是，仅仅根据Log2FoldChange来筛选差异表达基因可能不够准确，还需要考虑FDR（错误发现率）这个指标。FDR是通过对p值进行校正得到的，反映了差异表达分析中假阳性的概率

4 回答592 围观

问求助，小鼠脾脏淋巴细胞的培养

loveliufudan

小鼠脾脏淋巴细胞分离后，需要在含有一定浓度的细胞因子的培养基中培养，以刺激细胞增殖和活化。其中，IL-2是一种重要的细胞因子，它可以促进T淋巴细胞（包括调节性T细胞和效应T细胞）的增殖和存活。因此，你可以在你的培养基中加入适量的IL-2（例如10 ng/mL），并在37°C下5% CO2条件下培养24小时或更长时间。另外，你还可以考虑加入其他一些细胞因子，如IL-4、IL-7、IL-15等，以增强

5 回答908 围观

问求助！怎么检测自身反应性T细胞

sswei

T细胞上有绵羊红细胞受体，可形成E花环，E花结试验可用于计数T淋巴细胞。

4 回答484 围观

问可以看见明显趋势但actin不齐可以用吗

balalaLy

应该不行，NC组的内参太糊了，跟过表达差异那么大，这种情况会被质疑你的转染本身对细胞有影响。建议调一下上样量再跑一次

5 回答495 围观

问HIV胶体金试纸研发问题

huarenqiang5

主要考虑样本本身问题或PH值问题导致。

3 回答781 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序