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科研学霸天团，48小时有问必答

问想染小鼠脊髓的神经细胞，取完spinal cord 然后放入PBS，之后OCT frozen，忘了fix 和sucrose怎么办

loveliufudan

如果您在取完小鼠脊髓后，忘记了加入固定剂（如formalin等）或脱水剂（如sucrose等），那么这些细胞可能会受到影响，导致结果不可靠。如果您需要分析神经元的形态和分布，可以尝试使用已经固定和脱水的样本进行下一步操作。如果您需要进行免疫染色或原位杂交等实验，可以尝试使用冰冻切片来进行。在这种情况下，您可以将OCT中包裹着的脊髓组织切割成10-20微米的薄片，然后将其存储在-80°C的冰箱中。切

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问外泌体超速离心后，离心管底部出现褐色沉淀,这是为什么？

sswei

因为外泌体样品中含有杂质的缘故。

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问请问有用过IPP软件计算肾小球Masson染色后的胶原沉积积分CVF，具体的操作步骤是什么？

loveliufudan

1.打开IPP软件，导入Masson染色后的图像文件，将图像转换成灰度图像。2.选择“Measure”菜单，点击“Set Scale”选项，设置图像的比例尺。3.选择“ROI”菜单，使用鼠标或者其它工具选定感兴趣的区域，即肾小球区域。4.选择“Threshold”菜单，设置图像阈值，以分离胶原和其它组织成分。可以使用自动阈值或手动调整阈值的方式。5.点击“Analyze”菜单，选择“Measure

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问image J免疫荧光细胞计数为啥总出问题，显示阈值设置不对，为啥呀？

汤姆卜丽波

你可以自己设定选择合适阈值Image-Adjust-Auto Threshold选择Try all，点击OK后会列出所有算法设定的阈值：根据结果判断，选择Default算法即可

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问裁膜的时候不小心把膜从中间撕开了类似这样请问有啥影响吗

橙汁儿青柠味

如果撕到目的蛋白区域，会导致蛋白条带开裂

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问巨噬细胞代谢和肿瘤

loveliufudan

确实存在一些矛盾，但这是因为M1和M2巨噬细胞在肿瘤微环境中的作用是非常复杂的，不能简单地用促炎和抗肿瘤来划分。以下是一些解释：M1型巨噬细胞可以通过释放炎性细胞因子（如IL-12、IL-23、TNF-α等）和自由基等，来杀伤肿瘤细胞和病原菌，从而发挥抗肿瘤和抗感染的作用。但是，乳酸是肿瘤微环境中的一种重要代谢产物，其浓度较高时可以抑制M1型巨噬细胞的活性，并促进巨噬细胞向M2型巨噬细胞的极化，从

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问如何确定碱烧伤愈合后创面质量

烧伤科常医生

观察愈合情况可以通过表观：包括愈合速度，质量，颜色，疤痕的程度。可以通过病理学HE染色观察细胞分布皮肤附件的情况。Masson染色看胶原纤维分布，免疫组化可以观察血管化情况。通过上述方法，可以确定碱烧伤创面的愈合质量。

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问细胞悬液涂片可以进行免疫组化吗

loveliufudan

细胞悬液涂片可以进行免疫组化（IHC）检测。IHC是一种常用的细胞或组织检测方法，通过检测特定抗原的免疫反应性，来定位和鉴定细胞或组织中特定的蛋白质表达和定量水平。在细胞悬液涂片进行IHC时，需要先将细胞涂在载玻片上，然后进行固定、透明化、抗原修复、抗体染色等操作步骤。不同于组织切片，细胞悬液涂片的特点是细胞形态和结构比较单一，对于特定蛋白的定位，需要选择合适的抗体，并根据抗体的性能，针对具体的免

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问Hh信号通路中调节与Smo泛素化和去泛素化？

loveliufudan

下面是关于Hh信号通路中Smo泛素化和去泛素化调节的一些具体过程：泛素化：Smo的泛素化是通过E3泛素连接酶进行的，其中最重要的E3泛素连接酶是SPOP（speckle-type POZ protein），它能够将Smo的Lys751位点泛素化。Smo泛素化的结果是将Smo降解并抑制Hh信号通路的传导。去泛素化：与泛素化相反，Smo的去泛素化是通过去泛素化酶进行的。目前已知的Smo去泛素化酶包括U

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问克隆形成实验可以用T25的培养瓶嘛

橙汁儿青柠味

不建议用培养瓶，常用是6孔板，这样几种不同分组的还能方便对比。

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问研究动脉粥样硬化内皮细胞时，选哪种细胞比较好。除了人脐静脉细胞之外

loveliufudan

除了人脐静脉内皮细胞之外，可以考虑使用人肺微血管内皮细胞（HPMEC），人髂动脉内皮细胞（HIAEC）等来源的内皮细胞，这些细胞来源于人体内的不同器官，具有不同的特性和生理功能，适合用于研究不同疾病的发病机制。此外，还可以使用小鼠动脉内皮细胞（MAEC）等动物来源的内皮细胞作为模型，这些细胞来源于小鼠动脉组织，可用于研究动脉粥样硬化等相关疾病的发病机制。选择合适的内皮细胞需要考虑实验目的、研究对象

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问求助Ⅰ过敏性鼻炎大鼠造模鼻腔出血是什么原因？

sswei

氢氧化铝会致鼻腔粘膜干燥出血，需适当降低氢氧化铝的量。

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问免疫组化求助

balalaLy

优化实验条件最好不要同时改变多个因素。建议先用1:50的浓度延长孵育时间，如果做出来了再调整浓度。如果再做不出来，建议你考虑更换抗体或者是不是你的样品不表达。

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问去泛素化酶UCHL5具有什么作用？

loveliufudan

1.调控泛素降解途径：UCHL5参与调控泛素降解途径，可以从泛素化的蛋白质上去除泛素标记，从而减少它们的降解速度。UCHL5的活性还能够促进有降解目标的泛素连接酶E3的活性。2.调节蛋白稳定性：除了参与泛素降解途径外，UCHL5还能够直接调节某些蛋白的稳定性。例如，在胚胎干细胞中，UCHL5可以去除表观修饰蛋白SUZ12的泛素标记，从而增强其稳定性，维持干细胞状态。3.参与DNA损伤修复：UCHL

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问免疫荧光很多蓝点，请问是什么原因呢？

橙汁儿青柠味

这可能是一些细胞碎片或者操作中可能混入一些杂质，多用pbs洗涤几次

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问免疫细胞表面分子的连接结合和作用过程

土井挞克树

通过物理相互作用将细胞连接起来，这些相互作用既可用于信号通信，也可用于结构粘附。具体可参考文献：A physical wiring diagram for the human immune system

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问Jurkat/MA cells 是什么细胞啊？

汤姆卜丽波

是杂交细胞，同时具有两种细胞的遗传基因和特征

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问分析巨噬细胞的流式，必须低温吗？有替代方法吗

loveliufudan

一般而言，细胞的黏附能力会影响细胞染色后的流式细胞术分析结果。黏附能力较强的细胞在染色前可能需要额外的步骤来解除细胞的黏附，以免影响染色结果。对于巨噬细胞的流式细胞术分析，您可以尝试以下方法来减少黏附的影响：使用无血清培养基培养巨噬细胞，以减少黏附能力。采用不同的细胞解离液，例如含有EDTA的PBS溶液，以解除巨噬细胞的黏附。在染色前将细胞进行冷冻解冻，以减少黏附能力。在流式细胞术前将细胞处理成单

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问组织用戊二醛固定后还能做组化和免疫荧光吗？

土井挞克树

如果是研究细胞表面抗原或不稳定抗原固定后是不可以用的，其余的是可以固定的

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问求助：热应激处理iec-6细胞建模一直不成功，有类似经历的吗可以聊聊不

土井挞克树

一般热应激4小时左右就会有细胞活力下降，你失败的原因可能是应激温度不够。建议提高温度到46-54摄氏度

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