实验问答21,857,329 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问请问出现散乱不规则分布的原因是什么？

远古的早晨

多孔板可能好一些

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问小鼠脑部组织切片用什么方式比较好？

新天夏

如果是免疫荧光的话建议冰冻切片，如果是普通免疫组化使用石蜡切片更好。并建议在上述站友的基础上，在30%蔗糖脱水前使用20%蔗糖脱水一次，效果更好，待样品沉底，可以换30%蔗糖

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问大鼠脑组织的免疫组化，片子出现团块是什么原因？

handeping

以前做脑组织HE染色时就发现会出现均质红染的纤维样团块，团块数量每只鼠不一样，分布位置主要在白质，有的团块很大，有的较小。当时不是自己的试验，所以没有太关注为什么会有这些变化。所以推测你组化阳性染色的地方也可能是这些地方，会不会是非特异性染色。

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问4% 多聚甲醛灌流固定，不是0.1M PBS 配的，冰冻切片，漂染，发现片子易碎为什么？

hh54ll

那个组织的切片，固定时间多长，固定完成后用的什么处理的。问的太笼统了！

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问ELISA 酶联免疫吸附实验步骤一、四中的抗体是同一个吗？

xinqingruyu

步骤四是洗涤步骤，没有抗体，步骤五有抗体。步骤一的抗体和步骤四的抗体，可以是同一种抗体，也可以是不同种抗体，这样根据具体实验而确定，但是这两种抗体又是有区别的，步骤一的抗体作用是一端吸附于酶标孔，一端吸附待检物质，步骤五是被标记物（如HRP）标记的抗体，作用是放大前面步骤的反应效果，便于测试。

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问有时片子上的组织有裂纹，是脱水时间太长的缘故吗？

akitten

有可能也有可能是二甲苯透明时间过长拿出后封片速度较慢片子在空气中已干燥的话就会容易有裂纹出来

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问细胞膜做免疫荧光要用什么特异性抗体

长颈鹿叔叔

一抗标记IF的。IHC-P的意思是石蜡切片免疫组化技术，一般情况下石蜡能做的，冰冻也能做，你组织切的是什么就不能选择什么来源的，比如大鼠组织切片，一抗来源就需要选择兔或者是小鼠，二抗是根据一抗来源选择的，一抗是兔的就选XX抗兔，一抗是小鼠的二抗就选XX抗小鼠。

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问在各个序列相上呈现什么样的密度可以考虑为脊髓瘤呢？

我是金博士

1、脊索瘤的诊断特征：有不规则肿块，形态欠规整。在T1 加权图像上呈低信号，在T2加权图像上呈不均匀高信号。2、脊索瘤可以与鼻咽癌、脑膜瘤、颅咽管瘤以及软骨瘤鉴别。鼻咽癌起源于咽隐窝，信号强度较均匀，很少有钙化，有显著异常对比增强。颅中窝底脑膜瘤很少引起邻近骨的广泛破坏，T2WI 图像呈等信号甚至低信号，具有十分明显的异常对比增强。颅咽管瘤在T1WI 与T2WI 图像信号强度变化幅度大，增强较少见

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问免疫组化结果如何分析？

买买提奥

（1）阳性着色细胞计数法。在4undefined光镜下，随机选择不重叠的10个视野，人工或机器计数阳性着色细胞，每组3~6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。（2）灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。（3）评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评

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问腹膜纤维化掉片严重怎么办？

laiyimei

你可以试试用水浴锅来做抗原修复，掉片会有很大的改善！

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问请教免疫组化染色的问题

ykq08

我以前做HE染色的时候，如果染色过深的话会在75%酒精里面浸几秒钟，然后颜色就变浅了，你的会不会是因为酒精脱水造成的呢，仅供参考

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问测得样品浓度太高怎么办？

我是金博士

说明样品没有稀释到测量范围，稀释后再试试

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问如果用小鼠肝细胞免疫兔子应该怎么进行或是要怎样处理肝细胞呢？

huangjuan711

我好像只听过单克隆抗体，大三医学生路过。要得到抗体，自然是相应抗原的诱导了，哦，好像是先得到能产生目的抗体的基因，在整合到受体细胞基因，也有质粒携带的，然后抗原刺激，看是否表达目的抗体，再行筛选克隆成功的受体细胞，传代培养。有专业书籍介绍的吧

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问CBA 的两种试剂盒检测结果之间是否有可比性？

吉小思

有可比性的，因为这两种盒子都是通过荧光强度反应浓度的。

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问免疫组化中边缘效应很明显，请问有什么方法可以消除？

我是金博士

沿着同一方向研磨，磨久一点。还不行的话，试试超声。边缘效应很严重的话，可以在板边缘划线，另外，饱和一下溶剂再跑~~让点好样的板现在展开溶剂中饱和15min左右在展开，点样尽可能在板的中心也可以一定程度上减少边缘效应的影响。

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问如何最大限度地降低组织非特异性染色？

赵栋2012

1.缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。2. 一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。3. 内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色。4. 非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果。5. 缩短DAB孵育时间或降低DAB浓

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问求问 PBS 的清洗方式选择、次数和时间的选择？

tao0129

1. 单独冲洗，防止交叉反应造成污染。临床上每天检测的病例很多，所用的抗体种类及项目也多，如果在加入一抗孵育完后，将它们在一个缸内洗，这样就会造成交叉污染，影响最后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗，冲洗的PBS为一次性，保证切片没有相互交叉污染的机会。2. 温柔冲洗，防止切片的脱落。冲洗切片，取出切片，将PBS从上轻轻地冲洗，让PBS自上而下流下来，不要拿起切片将PBS对准切片冲洗，这样由于冲

1 回答2636 围观

问请问分离 PBMC 的具体实验步骤？

剑弦滴血

可以用分离液分离，你想分离小鼠的还是人的？

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问请问一抗和二抗孵育条件如何比较？

tao0129

1.一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1~2 h，而4度过夜和从冰箱拿出后37℃复温45 min。2. 二抗一般室温或37度30 min~1 h，具体时间需要摸索。

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问怎么样用免疫磁珠法分离小鼠骨髓巨核细胞呢？有特定的试剂盒吗？

极客医生

CD41抗体配免疫磁珠加MACS Large Cell column，貌似没有直接偶联CD41的磁珠，但有有巨核细胞分离液啊。

1 回答2536 围观

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