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        凝血酶为什么可以切割His tag ?

        相关实验:凝血酶原时间(PT)测定实验

        user-title

        Angela211

        凝血酶的最佳切割位点不是X4-X3-P-R-X1-X2吗?为什么能够去除6个his呢?

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        4 个回答

        user-title

        dxy_sc8birfe

        有帮助

        想请问一下 那是不是在his标签和表达的蛋白的序列之间加一个精氨酸就可以用酶切掉标签了

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        凝血酶可以切割带有His标签的蛋白质,但它并不是特异性地切割His标签。凝血酶的切割位点通常是Arginine (R) 或Lysine (K) 之后的Peptide Bond。因此,当His标签中存在Arginine或Lysine时,凝血酶可以将His标签从蛋白质中切割出来。

        对于标准的His标签序列,通常是6个连续的Histidine残基,如His-His-His-His-His-His。凝血酶可以切割位于His标签之后的Arginine或Lysine之后的Peptide Bond,从而将His标签从蛋白质中剥离。

        需要注意的是,凝血酶的切割位点不仅限于×4-×3-P-R-×1-×2的序列,这只是一种常见的凝血酶切割位点模式。凝血酶可以切割更广泛的肽键,具体切割位点取决于蛋白质的序列和结构。因此,在设计实验时,需要考虑目标蛋白质的具体序列和可能的凝血酶切割位点,以确保凝血酶可以有效地切割His标签。

        user-title

        sswei

        有帮助

        凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶,凝血酶切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',这里X4 和X3 是疏水氨基酸而X1'和X2'是非酸性氨基酸,一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是X2-R[K]-X1', 这里X2 或者X1'是甘氨酸,例如A-R-G 和G-K-A,这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和N 末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切,通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。Hⅰstag由于存在切割位点,故而可以发生切割。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        凝血酶的切割位点与his tag相似,所以可以用来切割his tag


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