• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        求助质粒转染问题,要做鱼类细胞稳转

        相关实验:质粒转化大肠杆菌

        user-title

        XJJyyds

        质粒是pEGFP-N1,目的基因是Bax,转染的是异育银鲫尾鳍细胞系贴壁细胞(我们实验室自己构建的),转染(转染试剂是lip3000)做了很多次去年十二月底转的一次重组质粒能看到绿色荧光,刚要用G418筛自己阳了,后面恢复了之后就再也没转进去过。现在老师开组会每次都要汇报进展,真的很头疼。

        目前转染的情况是转染空质粒能看见一些荧光但效率也很低,转重组质粒一点也看不见,而且不管是转染空质粒和重组质粒细胞死亡都挺多的。

        查了一些文献有的做稳转在转染之前把重组质粒线性化再做,我想求助有没有这个必要呢?还有就是现在怎么转都转不进去能请教一下大家的经验吗?

        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        建议更换质粒,这个质粒时间长很有可能已经失效了

        user-title

        sswei

        有帮助

        传染失败,主要有三个原因:

        1: 细胞本身难转,查资料看,这个细胞好转吗,用什么试剂。

        2:质粒质量不好,质量差的质粒,是转不进去,或者表达不了的。

        3:其他原因。比如,细胞状态不好,试剂过期等等。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        质粒转染是细胞实验中的一个关键步骤,如果出现问题可能是多方面原因导致的。以下是一些可能的解决方案,供您参考:

        尝试不同浓度的转染试剂。您可以尝试使用不同浓度的lip3000试剂来转染细胞,可能需要进行一定的优化才能找到最适合您的实验条件。

        尝试使用不同的转染试剂。如果lip3000试剂无法转染您的细胞,请尝试使用其他品牌的试剂。

        尝试使用不同的细胞。不同类型的细胞对转染试剂的敏感性可能不同,您可以尝试使用其他细胞系进行转染,比如HEK293T。

        尝试使用线性化的质粒。将质粒线性化可以增加转染效率,因为线性化的质粒更容易进入细胞核。

        尝试优化转染条件。您可以尝试优化转染的时间、温度和细胞密度等条件,以提高转染效率。

        检查质粒的纯度。如果质粒的纯度不高,其中可能会包含有害物质,可能会影响转染效率。您可以尝试纯化质粒,或使用商业提供的高质量质粒。

        检查细胞的健康状况。细胞的健康状况可能会影响转染效率。请确保细胞处于良好的生长状态,没有感染等问题。

        至于您提到的线性化质粒的问题,线性化质粒能够提高质粒的转染效率,但是否必要取决于您的实验。对于某些实验,线性化质粒并不是必需的,但对于一些难以转染的细胞系,线性化质粒可能是必须的。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        你这个情况还是建议做稳转在转染之前把重组质粒线性化再做。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序