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        用sephadex g-100纯化蛋白柱子很堵,流速极其慢,请问怎么解决?

        相关实验:蛋白纯化实验

        user-title

        dxy_545k046e

        我纯化的具有抑菌活性蛋白分子量大概在18000da,粗提后经过阳离子柱纯化,收集的单峰有抑菌活性,蛋白浓度只有1mg/ml,然后收集到的峰进一步用sephadex g-100纯化,填料之前别人使用过三次,用完洗了之泡在20%的乙醇里面保存,我用的柱子是100cm的,流速1ml/min,做的时候流动相流的很慢,流出的速度非常慢,而且会在凝胶上方积起来,反压还会把柱子上方顶开,请问是凝胶填料的问题吗?是的话要怎么处理?

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        1 个回答

        user-title

        百泰派克-李工

        有帮助

        使用Sephadex G-100纯化蛋白时,如果遇到柱子堵塞和流速极其慢的问题,可以尝试以下几种方法来解决:

        1.检查柱子的装填:

        确保Sephadex G-100介质在装填时均匀且没有空气泡。如果存在空气泡或装填不均,柱子的流动性会受到影响。

        2.调整样品的体积和浓度:

        如果样品的体积过大或者浓度过高,会导致柱子堵塞。尝试减少样品的加载量或者稀释样品。

        3.提高缓冲液的强度:

        有时候增加缓冲液的强度可以帮助改善流动性。例如,提高缓冲液中的盐浓度。

        4.温和清洗柱子:

        如果柱子已经被堵塞,可以尝试用较高盐浓度的缓冲液或含有洗脱剂的缓冲液进行温和清洗。

        5.重新装填柱子:

        如果以上方法都不能解决问题,可能需要重新装填柱子。这包括清洗和再平衡Sephadex G-100介质。

        6.检查系统的其他部分:

        确保所有连接和管路没有堵塞或泄漏,这些也可能导致流速减慢。

        如果问题持续存在,可以考虑咨询制造商或寻求专业的技术支持。


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