液相实验中一些物质的含量测定方法是如何确立的？比如一些流动相是哪些物质，以及梯度洗脱的程序是咋样的？都是怎么确定的？

流动相选择可以参考以下方面：

一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

选择流动相时应考虑以下几个方面：

①流动相应不改变填料的任何性质：

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度：

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配：

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低（应<2cp）：

高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长，最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜：

如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收：

应选用挥发性溶剂。

下面是一些常见的方法：

1. 流动相的选择：流动相是指在液相色谱（HPLC）等分离技术中用于溶解样品和分离目标物的溶液。流动相的选择通常基于目标物的性质和分离条件的要求。通过试验和文献研究，确定具有适当溶解度、分离能力和稳定性的溶剂组合。

2. 梯度洗脱程序：梯度洗脱是一种在液相色谱中使用不同组成的流动相以实现分离的方法。梯度洗脱程序通常通过先设置初始条件，然后在分析过程中逐渐改变流动相的组成来实现。梯度洗脱程序的确定需要考虑样品的复杂性、目标物的保留时间、分离度要求等因素。通常会进行试验和优化，以找到最佳的梯度洗脱程序。

3. 标准曲线和校准：为了测定物质的含量，通常需要建立标准曲线。标准曲线是通过测量已知浓度的标准样品并绘制浓度与测量信号（如峰面积或峰高）之间的关系图。通过线性拟合或其他适当的方法，可以根据标准曲线来确定未知样品的含量。

在液相实验中，物质的含量测定方法的确立通常包括以下步骤：

选择合适的检测器：根据被测物质的性质和含量范围，选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器、荧光检测器、电化学检测器等。

确定流动相：根据被测物质的性质，选择合适的流动相，如甲醇、乙腈、水等，同时确定流动相的比例和洗脱程序。

建立标准曲线：将已知浓度的标准品进行液相色谱分析，得到峰面积或峰高与浓度的关系曲线，用于被测物质的定量分析。

确定样品前处理方法：根据样品中可能存在的干扰物质，选择合适的前处理方法，如蛋白沉淀、萃取、柱分离等。

优化实验条件：包括色谱柱的选择、流速、柱温、进样量等实验条件的优化，以提高方法的灵敏度、准确性和精密度。

验证方法可靠性：进行空白试验、回收率试验、精密度试验、方法比对等实验，以验证方法可靠性。

对于滴度洗脱程序，一般需要根据被测物质的性质和色谱图的特点进行设计。通常需要考虑以下几点：

洗脱程序中流动相的比例和组成：根据被测物质的极性和溶解度，选择合适的流动相比例和组成，以实现在色谱柱上的有效分离。

洗脱程序的梯度：根据被测物质的保留时间和色谱图的特点，设计合适的梯度程序，使被测物质在最佳时间范围内得到分离和检测。

洗脱程序的时间：根据被测物质的保留时间和色谱图的特点，设计合适的洗脱程序时间，确保被测物质能够完全分离和检测。

洗脱程序的流速：根据色谱柱的规格和填料的性质，选择合适的流速，以保证实验的重现性和准确性。

通过以上步骤和考虑点的确立，可以建立可靠的液相实验中物质的含量测定方法，为实验结果的准确性和可靠性提供保障。