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        质粒在DH5α里 长,但在DH10α里不长呢?

        相关实验:杆状病毒-昆虫细胞表达系统

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        dxy_ai11ha80

        质粒在DH5α里➕amp可以正常生长,但在DH10α里➕amp,kana,庆大霉素,四环素没有斑点,连蓝斑都没有,这种情况为什么呢,我应该怎样做呢?(质粒与感受态都没有问题)

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        2 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        降低庆大霉素和四环素的浓度再培养。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        DH10a转化后没有任何斑点,包括蓝色和白色斑点,这种情况可能有以下几种可能性:

        感受态细胞存储或处理不当,导致转化率较低。在进行质粒转化前,感受态细胞的存储条件和处理方法需要符合实验要求,如冷冻保存时需要使用适当的细胞冻存液,解冻时需要采取适当的方法,如快速浸入42℃水浴中使细胞迅速解冻,并迅速加入培养基中;

        质粒的抗性基因在DH10a中表达受阻,导致无法正常筛选出转化成功的细胞。此时可以考虑使用其他含有不同抗性基因的质粒进行转化筛选,或者尝试将该质粒转化至其他菌株中进行筛选,观察转化效率是否受影响;

        筛选条件不当,如抗性药物的浓度过高或过低、筛选时间过短等。在进行质粒筛选时,需要选择适当的抗性药物浓度和筛选时间,以保证转化细胞的生长和扩增。

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