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        WB有内参没目的会是蛋白降解吗?

        user-title

        dxy_suv75yu2

        一星期前新提的蛋白,今天跑的是第三次,但是只有第一次跑出来了几个目的的条带,后面第二次第三次再也没有跑出来条带

        第二次跑的时候,一抗有新配的,也有用了2,3次的

        第三次二抗新配的

        但是目的蛋白都没有,都是一片空白

        内参每次都跑的出来

        请问这个情况是蛋白降解了吗?

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        6 个回答

        user-title

        申东熙老伯

        有帮助

        蛋白降解的话内参应该也跑不出来,单纯降解目的条带的情况有点罕见,更考虑是蛋白样品存放和实验操作的问题。

        user-title

        wildC8OG

        有帮助

        有可能降解了,也有可能抗体浓度不够,是否蛋白反复冻融过?如果没有,一抗,二抗孵育的时间分别是多少,二抗建议用两次就换新配置的二抗

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        可能是一抗问题,内参有条带,说明样品降解还没那么严重

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        你的这个情况不一定是蛋白降解导致,

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        一般来讲蛋白不会那么容易降解,可能是你的目的蛋白本身表达就比较少,再加上抗体的效价比较低,就比较难做出来。建议先提高抗体浓度试一下

        user-title

        NatureBios

        有帮助

        这种情况,我们通常考虑的是三次实验中的变量,你说的蛋白降解也是一种可能性,抗体和样本按照说明书冻存,既然后面的样本做不出来了,我们可以重新制备样本,严格按照SOP操作规程,再做一次,通常一个不起眼的小疏忽,就会导致没有结果

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