western blot 敷了二抗以后还能再敷一抗吗？

如果做的不好，可以把发光试剂洗一洗，然后重新孵同样的一抗。如果要加不同的一抗，你就用stripping液洗膜，然后再加。

可以的，最好是先孵表达比较弱的蛋白，显影之后洗脱掉再孵表达比较强的蛋白

可以用一抗二抗洗脱液洗完后再重新封闭敷一抗二抗

最好不要，如果结果里面有非特异信号的话，就说不清楚了。