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        新手小白WB实验内参总是跑的不好?

        user-title

        请喊我梦梦

        图片描述

        新手小白,刚做WB,求大神指教!

        分子量为113kda,分离胶制的6%,跑了几次,条带都挺粗的,一抗比例也稀释过,结果都差不多。这次上样量也从30ug减少到了20ug,条带感觉还是很粗?求教还有什么其他原因导致。 这样的结果是不是不能用

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        3 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        这个条带最好是别用,不太好。可能是你的电泳液使用次数太多。可能是你的抗体特异性不好,出现了非特异性条带。

        user-title

        府宅

        有帮助

        提取的粗蛋白样品里面有杂质,细胞里面除了含有蛋白质还有核酸、多糖、纤维素等大分子,这些大分子浓度较高时会使样品黏连,造成条带跑的不够整齐。

        如果是从胞浆里提取的粗蛋白,怀疑可能是核酸或多糖过多造成的样品黏连,建议12000转离心3min,去除底部杂质,取上清液跑电泳试试。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        1.电泳缓冲液用的次数过多,一般来说电泳缓冲液用过两次以后电泳的效果就会变差。

        2.电泳的浓缩胶和分离胶缓冲液的PH没有调好或浓度没有调好。浓缩胶和分离胶胶浓度的变化和PH的变化让电泳样品压缩在一起。一般情况下浓缩胶缓冲液(Tris—HCl,pH6.8)、分离胶缓冲液(Tri s—HCl, pH8.8)。

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