蛋白质免疫印迹实验总蛋白量多少？

每个孔至少要10-15ug，如果目标蛋白在总蛋白中丰度低，还需要加大上样量。重要的是总蛋白样品制备时蛋白没有丢失，否则上再大量的蛋白样依然是检不出。尤其目前大部分总蛋白的制备用RIPA来制备，其实ripa只提取RIPA可溶性蛋白，ripa提取总蛋白丢弃部分还是有很多蛋白的，细胞核和细胞器以及细胞膜上的蛋白大部分因为不能溶解在RIPA裂解液里，所以这些组分大部分会在RIPA不可溶性组分里。总蛋白提取可以用柱式法提取，可以将全部蛋白一次性提取出来，不用担心丢失问题

最少30微克，建议先做个预实验看一下蛋白能不能跑出来，也有不检测蛋白浓度直接上样跑的，这种就是看内参齐不齐，容不容易跑出来。

一般选取多少20-30ug的量进行蛋白质免疫印迹实验.

20ug左右的蛋白量足够跑大部分的蛋白