请问大佬们有没有遇到过质粒转入293t中表达，但目的细胞不表达的情况？

1.用慢病毒感染293T再是一下，如果还有表达那只能说明你的目的细胞对这套系统不合适。

2.可能你的细胞本身对这个筛选的抗生素抵抗，所以你筛不到目的细胞，导致wb显不出来。

原因有很多可能：

质粒上的目的基因被宿主系统破坏；

目的基因对应蛋白对细胞有毒害作用，被细胞反馈调节到抑制表达；

目的基因表达与细胞本身特点能力不符；

质粒载体选择与表达系统不合适；

不表达，从基因上开始分析，无论是用那种宿主表达蛋白，真核表达或是原核表达，都要考虑到基因优化的层面，如果基因本身不适在此系统中表达，那么下游在怎么优化也是不表达的

优化转染的条件