WB条带白色背景黑色是什么原因？

很多时候是因为封闭的不好，或者洗膜洗的不干净的原因导致的。

.一抗浓度太高，用个两三次就好了；封闭不完全，时间不够。洗脱时间次数不够。

你蛋白太多了,辣根过氧化物反应太剧烈，烧心了。所以来不及曝光，已经烧没了

内参蛋白也是这样的话，考虑ECL显影出问题了

可能是抗体太浓了，降低一抗和二抗的浓度。

1.洗膜不充分，增加洗涤液的体积和洗涤次数；在洗涤液中加入Tween=20。

2.二抗浓度过高，引起了一些非专一性的抗原-抗体相互作用，适当降低二抗浓度，可以分梯度进行。

3.二抗的识别抗原免疫簇不唯一，这是因为二抗是多克隆抗体，使用单克隆抗体的二抗，此时二抗的识别抗原免疫簇是唯一的，其非专一性的抗原-抗体相互作用会大为减少。当然，有时，单克隆抗体也会有识别抗原免疫簇不唯一，如果两种蛋白质的抗原免疫簇的结构很相近的话。如果不知道是不是二抗的识别抗原免疫簇不唯一，可以不加一抗的情况下只加二抗实验，可以检测出是否为二抗的的抗原免疫簇的识别的原因，若是的话，可以先更换封闭试剂，若无效，则要同时更换二抗。

4.封闭不充分，增加封闭液的封闭时间，适当提高温度，更换封闭液。

5.曝光过度，缩短曝光时间。

6.检测过程中膜干燥，保持充分的反应液，避免膜干燥。

7．若无别的选择，可尝试选择5%的脱脂奶粉，同时加入Tween=20。

8.滴定一抗或二抗的效价，找到一个产生清晰的信号强度可以接受的较低的抗体浓度。

9.缩短一抗和二抗的孵育时间

1⃣️封闭没封闭好；2⃣️

抗体特异性不好，或者浓度过高