• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        做WB曝光后目的蛋白位置出现2个相邻条带,但是抗体说明书上没有提过会有2条带情况,原因可能是什么呢?

        user-title

        养点鱼吃火锅

        wx-share
        分享

        6 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        1.你的目的蛋白,可能经过修饰了,例如磷酸化,糖基化等。2.胶灌的不匀,runing buffer出问题了。3,转膜的夹子出现问题,转膜没转好,4.如果用胶片,可能时曝光过程中,手移位了。

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        有可能是抗体本身原因,我们实验室经常会。出现这种情况,说明书也不是完全正确

        user-title

        邓豆豆逗

        有帮助

        可以先看一下抗体官网的一些效果图,是否做出来有两条带的现象,其次查一下相关文献,看这个蛋白是否有剪切体或一些修饰之类的,还有可能是蛋白降解了,这时候可以找一个阳性对照一起做,如果阳性对照是单条带,就考虑是样本的原因了

        user-title

        txs900416

        有帮助

        避免操作问题后,有可能多个原因:1、抗体特异性不好;2、目的蛋白发生了修饰分子量发生了改变

        user-title

        dxywode

        有帮助
        比如构建3a和3b的克隆,不能带HA、flag等tag。转染细胞之后一起跑胶比对位置
        或者针对3a和3b的公共序列设计干扰片段,转染细胞。两条带应该都下降
        再针对3a或者3b不同的地方设计干扰片段,转染细胞。应该就只有一条带下降。
        或者找只识别其中一个变体的抗体,或者定制。

        user-title

        bqejjh123

        有帮助

        我觉得上边的带肯定是条带,因为你的曝光太强了,如果曝光再弱一些,它就是一条细细的带了,上边的带应该是你的目的蛋白,因为第一过表达蛋白一般会比较强,第二右边的样品里没有上侧条带,下面的带可能是杂带。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序