Western Blot 中抗体反复冻融会影响结果吗？

我因为做 WB 实验总是没结果，就严格按照 cell signal 的说明书进行操作，将多抗用 5% 的 BSA 稀释成 10ml 后 4 度冰箱孵育过夜，但是依然无结果。我将稀释后的抗体准备重复使用，但是原来未稀释前在 -20 度时抗体不结冰，现在稀释后则结冰，这样用时反复冻融会不会影响结果。